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专利号: 201610200516X
申请人: 商丘师范学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.用于检测β-淀粉样蛋白(Aβ)寡聚体的类免疫电化学传感器的制备方法,其特征在于,通过如下方法实现:(1)、选用核酸适配体

选用与Aβ寡聚体具有强结合能力的核酸适配体,其序列为:GCCTGTGTTGGGGCGGGTGCG,并进行5'SH C6的修饰;

(2)、制备AuNPs溶液:将柠檬酸溶液加入到煮沸的HAuCl4·4H2O溶液中,搅拌反应,然后冷却到室温,得AuNPs溶液,放置在冰箱中备用;取制备好的AuNPs和硫堇溶液混合,室温下搅拌,离心,取下层,用培养液溶解;最后加入上述核酸适配体,在室温搅拌下反应,经离心、洗涤、溶解,即得到核酸适配体和硫堇共同修饰的AuNPs共轭物;

(3)、氧化石墨烯的合成及羧基功能化

采用改进的Hummers法制备氧化石墨烯: A、低温反应阶段,在0-4℃冰浴中,加入浓硫酸,再加入石墨粉及硝酸钠,搅拌反应后从冰浴中取出 ,10-20℃条件下,缓慢加入高锰酸钾并持续搅拌反应;B、中温反应阶段,将上述溶液移到37-40℃的水浴中,加入去离子水,继续搅拌,反应停止后冷却到室温;C、将混合溶液移入到约90-95℃水浴中,在搅拌的条件下继续反应,随后加入去离子水终止反应;再加入H2O2,搅拌条件下反应;最后加入HCl,经洗涤、真空干燥后即得到氧化石墨烯固体;

(4)、取上述制备好的氧化石墨烯固体溶于超纯水中配制成溶液,随后向其中加入NaOH和一氯乙酸,在超声波条件下进行反应,使氧化石墨烯表面的羟基和环氧基变成羧基,经过滤、洗涤、真空干燥、称量、再溶解,得到羧基化的氧化石墨烯溶液;

(5)、电化学传感器的构筑:A、 通过滴涂的方式将羧基化的氧化石墨烯修饰到玻碳电极上,在红外灯下烤干,作为基质材料;B、 将该电极在酰胺键活化试剂NHS/EDC中活化,并用去离子水洗涤;C、 然后将该电极浸入到抗体溶液中反应,接上抗体,接着用PBS缓冲溶液洗涤,除去表面物理吸附的物质;D、 用牛血清蛋白封闭溶液进行处理,消除非特异性结合的影响和封闭其余的活性位点;E、将电极浸入到不同浓度的Aβ寡聚体溶液中,通过抗体与抗原的特异性结合识别Aβ寡聚体;F、将该电极放入含有上述制备的AuNPs共轭物的溶液中培养,形成“三明治”型的类免疫传感器。

2.如权利要求1所述的用于检测Aβ寡聚体的类免疫电化学传感器的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,柠檬酸与HAuCl4·4H2O的摩尔比为2:1;AuNPs和硫堇溶液的体积/摩尔比为7:0.22mL/mM;核酸适配体在溶液中的浓度为0.9μM。

3.如权利要求1所述的用于检测Aβ寡聚体的类免疫电化学传感器的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,浓硫酸、石墨粉、硝酸钠和高锰酸钾的摩尔比为1 : 0.20 : 0.014 : 

0.045。

4.如权利要求1所述的用于检测Aβ寡聚体的类免疫电化学传感器的制备方法,其特征在于,步骤(5)中,NHS/EDC摩尔比为1:15。

5.如权利要求1所述的用于检测Aβ寡聚体的类免疫电化学传感器的制备方法,其特征在于,步骤(5)中,抗体溶液浓度为10μg/mL;步骤(4)中羧基化的氧化石墨烯溶液浓度为

0.5mg/mL。

6.用于检测Aβ寡聚体的类免疫电化学传感器,其特征在于,通过权利要求1-5其中之一所述的方法制备而成。