1.式(Ⅲ)所示结构的LMG半抗原的制备方法,其特征在于,是将4-巯基苯甲醛溶于无水甲醇中,向其中加入 N,N-二甲基苯胺和催化剂BOP,在氮气保护情况下加热回流,反应过夜,反应结束后,过滤干燥即得,(Ⅲ)。
2.一种同时检测AMOZ、MG及LMG的免疫检测方法,包括以下步骤:S41. 分别将AMOZ包被抗原、LMG包被抗原包被在同一酶标板的不同微孔内,孵育、洗板、封闭;
S42. 分别将AMOZ的标准液、LMG标准液或待测样品液加入酶标板相应微孔内;所述样品液经还原剂处理;
S43.将抗 AMOZ和 LMG的双特异性抗体溶液加入酶标板所有微孔内,孵育、洗板;
S44.将酶标二抗溶液加入酶标板所有微孔内,孵育、洗板;
S45.将显色液加入酶标板所有微孔内,孵育;
S46.将终止液加入酶标板所有微孔内,并将酶标板用酶标仪读数;
S47.分别绘制 AMOZ和 LMG的标准曲线,定量检测 AMOZ和 LMG;
其中,步骤S42所述还原剂为硼氢化钠、硼氢化钾或硫代硫酸钠溶液;
步骤S45所述显色液为步骤 S44所述酶标二抗中酶所对应的的底物溶液;
步骤S46所述终止液为浓硫酸或氢氧化钠溶液;
步骤 S43所述抗 AMOZ和 LMG的双特异性抗体的制备方法包括以下步骤:S31.设计合成式(I)所示的结构的 AMOZ半抗原和式(Ⅲ)所示的结构LMG半抗原,并分别将其与载体蛋白偶联,制备式(Ⅱ)所示的结构AMOZ人工抗原和式(Ⅳ)所示的结构的 LMG人工抗原;
S32.分别利用式(Ⅱ)所示的结构的 AMOZ人工抗原和式(Ⅳ)所示的结构的 LMG人工抗原制备能分泌抗 AMOZ单克隆抗体的杂交瘤细胞株和抗 LMG单克隆抗体的杂交瘤细胞株;
S33.采用杂交-杂交瘤技术筛选制备得到抗 AMOZ和 LMG的双特异性抗体,(I);
(Ⅱ);
(Ⅲ);
(Ⅳ)。