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专利号: 2016102164819
申请人: 重庆理工大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种新城疫病毒压电免疫传感检测方法,其特征在于:步骤如下,

1)先在石英晶体表面包被葡萄球菌A蛋白;

2)再将制备的新城疫病毒单克隆抗体与葡萄球菌A蛋白结合,得到新城疫病毒压电免疫传感器;

3)然后将新城疫病毒压电免疫传感器插入被检样品中,通过检测仪检测石英晶体是否出现谐振频率变化,如出现谐振频率变化,则说明被检样品中有新城疫病毒,否则被检样品中没有新城疫病毒。

2.根据权利要求1所述的新城疫病毒压电免疫传感检测方法,其特征在于:步骤1)在石英晶体表面包被葡萄球菌A蛋白时,将洗涤烘干后的石英晶体置于葡萄球菌A蛋白溶液中,在37℃保持30min即可,其中葡萄球菌A蛋白溶液浓度为0.2mg/ml。

3.根据权利要求1所述的新城疫病毒压电免疫传感检测方法,其特征在于:步骤2)新城疫病毒单克隆抗体与葡萄球菌A蛋白结合时,将步骤1)表面包被有葡萄球菌A蛋白的石英晶体置于新城疫病毒单克隆抗体溶液中,在37℃保持30min即可,其中新城疫病毒单克隆抗体浓度为0.2mg/ml。

4.根据权利要求1所述的新城疫病毒压电免疫传感检测方法,其特征在于:步骤3)检测石英晶体是否出现谐振频率变化的时间不低于30分钟。

5.根据权利要求1所述的新城疫病毒压电免疫传感检测方法,其特征在于:所述葡萄球菌A蛋白按如下方法提取,复苏并培养金黄色葡萄球菌1.800菌株,收集菌液,采用溶解酶处理并离心,上清用饱和硫酸铵沉淀,PBS溶解后转入透析袋透析;透析物用小鼠I g G-sephrose 4FF 亲和层析柱纯化;吸附在柱上的SPA用0.1M,pH2.7 盐酸甘氨酸缓冲液洗脱;

收集样品,合并透析,浓缩后备用。

6.根据权利要求1所述的新城疫病毒压电免疫传感检测方法,其特征在于:所述新城疫病毒单克隆抗体按如下方法制备,复苏新城疫病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株4E11,培养至其对数生长期,取12周龄的BALB/ c小鼠若干只,并分别腹腔注射弗氏不完全佐剂,0.2-

0.3ml/只;3天后腹腔接种用无血清培养基稀释的杂交瘤细胞,每只小鼠1—3×106/0.3ml;

间隔5天后,每天观察小鼠腹水产生情况,如腹部明显膨大,以手触摸时,皮肤有紧张感,即可采集腹水,纯化即得新城疫病毒单克隆抗体。

7.根据权利要求1所述的新城疫病毒压电免疫传感检测方法,其特征在于:步骤3)检测石英晶体谐振频率是否变化时,以新城疫病毒标准抗原作阳性对照,禽流感病毒作阴性对照,PBS液作空白对照。

8.根据权利要求1所述的新城疫病毒压电免疫传感检测方法,其特征在于:将不同的新城疫病毒压电免疫传感器对应插入抗原浓度不同但已知的标准抗原中,检测不同浓度标准抗原下石英晶体刚插入时的初始谐振频率及谐振频率稳定时的稳定谐振频率,得到不同浓度对应的频率差,即频移值,进而得到抗原浓度与频移值的关系曲线;然后再进行步骤3),如石英晶体出现频率变化,进一步确定被检样品对应的频移值,根据抗原浓度与频移值的关系曲线,即可得到被检样品中新城疫病毒浓度。