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专利号: 2016103086450
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种分泌表达转肽酶SortaseA的基因工程菌,其特征在于,选择AOX1或GAP启动子,以毕赤酵母SMD1168为表达宿主,以pPIC9k为表达载体,构建得到分泌表达SortaseA的基因工程菌。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌,其特征在于,以AOX1为启动子。

3.一种应用权利要求1所述的基因工程菌生产转肽酶SortaseA的方法,其特征在于,是诱导培养重组毕赤酵母使其表达转肽酶SortaseA。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,重组毕赤酵母在BMGY培养基中活化;所述BMGY培养基含13.4g/L不含氨基酸的YNB,20g/L蛋白胨,10g/L酵母膏,10g/L甘油,100mM磷酸盐。

5.根据权利要求3或4所述的方法,其特征在于,将活化后的重组毕赤酵母转接至初始pH6.0的BSM无机培养基中,28℃诱导产酶,每隔24h加入1.5%含微量元素的纯甲醇进行诱导表达,诱导培养72h。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述BSM无机培养基含26.7ml/L磷酸,

0.93g/L硫酸钙,18.2g/L硫酸钾,14.9g/L硫酸镁,4.13g/L氢氧化钾,40g/L甘油;所述含微量元素的纯甲醇是含CuSO4·5H2O 6.0g/L,KI 0.088g/L,MnSO4·H2O 3.0g/L,Na2MoO4·

2H2O 0.2g/L,H3BO3 0.02g/L,CoCl2·6H2O 0.5g/L,ZnCl2 20.0g/L,FeSO4·7H2O 65.0g/L,Biotin 0.2g/L,浓H2SO4 5.0mL/L的纯甲醇。

7.权利要求1所述的基因工程菌的应用,其特征在于,所述应用包括在生物化学、蛋白质组学、生物医药或生物工程技术领域中的应用,以及在制备蛋白质或多肽的连接工具中的应用。