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专利号: 2016103333091
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种产琥珀酸的酿酒酵母基因工程菌,其特征在于,以酿酒酵母为出发菌株,用苹果酸脱氢酶基因替换了乙醇代谢途径中的丙酮酸脱羧酶基因PDC1,并敲除了琥珀酸代谢途径中的琥珀酸脱氢酶基因SDH2。

2.根据权利要求1所述的一种产琥珀酸的酿酒酵母基因工程菌,其特征在于,所述苹果酸脱氢酶基因来源于米根霉。

3.根据权利要求1所述的一种产琥珀酸的酿酒酵母基因工程菌,其特征在于,所述琥珀酸脱氢酶基因SDH2的核苷酸序列如Gene ID:1360234所示。

4.根据权利要求1所述的一种产琥珀酸的酿酒酵母基因工程菌,其特征在于,所述酿酒酵母为酿酒酵母CEN.PK2-1C;其基因型为:MATa;ura3-52;trp1-289;leu2-3,112;his3Δ1;

MAL2-8C;SUC2。

5.一种构建权利要求1-4任一所述的酿酒酵母基因工程菌的的方法,其特征在于,将序列如SEQ ID NO.5所示的PDC1替换敲除盒,以及SDH2敲除盒,分别转化酿酒酵母CEN.PK2-

1C,构建得到产琥珀酸的酿酒酵母基因工程菌。

6.一种应用权利要求1-4任一所述酿酒酵母基因工程菌发酵生产羧酸的方法,其特征在于,所述羧酸包括乳酸、丙酮酸、苹果酸、延胡索酸、琥珀酸、α-酮戊二酸。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,包括以下步骤:将30℃、220rpm下培养24h的基因工程菌种子以5%的接种量转入发酵培养基于30℃、220rpm条件下培养96h;发酵培养基:无氨基酵母氮源1.7g/L、(NH4)2SO45g/L、葡萄糖20g/L,添加碳酸钙5g/L。

8.根据权利要求6或7所述的方法,其特征在于,采用酿酒酵母CEN.PK2-1C为出发菌株时,发酵培养基中还需添加亮氨酸100mg/L、色氨酸20mg/L、组氨酸20mg/L、尿嘧啶20mg/L。

9.权利要求1-4任一所述酿酒酵母基因工程菌在构建羧酸高产菌株中的应用。