1.一种检测碱性磷酸酶的方法,其特征在于,所述检测碱性磷酸酶的方法包括以下步骤:
a、将抗坏血酸磷酸酯AAP溶液和一系列浓度梯度的碱性磷酸酶ALP溶液混合在PBS缓冲溶液中,然后加入CuSO4溶液,反应,得到混合溶液;
b、分别在步骤a制备的混合溶液中加入HRP溶液,室温下反应后,加入TMB-H2O2显色溶液,分别检测其吸光度,构建碱性磷酸酶ALP溶液浓度与吸光度的线性关系;
c、利用线性关系,得到待检测碱性磷酸酶ALP溶液浓度。
2.根据权利要求1所述的检测碱性磷酸酶的方法,其特征在于,步骤a中所述一系列浓度梯度的碱性磷酸酶ALP溶液的浓度为:0 mU/mL,10 mU/mL,20 mU/mL,40 mU/mL,60 mU/mL,80 mU/mL,100 mU/mL和120 mU/mL。
3.根据权利要求1或2所述的检测碱性磷酸酶的方法,其特征在于,步骤a中,PBS缓冲溶液的pH为5-9。
4.根据权利要求1或2所述的检测碱性磷酸酶的方法,其特征在于,步骤a中所述反应,具体为在20-25℃下反应5-90min。
5.根据权利要求1或2所述的检测碱性磷酸酶的方法,其特征在于,步骤a具体为:将10 µL 1mg/mL的抗坏血酸磷酸酯AAP溶液和15 µL一系列浓度梯度的碱性磷酸酶ALP溶液混合在100mL pH=7.4的 PBS缓冲溶液中,浓度梯度分别为0 mU/mL,10 mU/mL,20 mU/mL,40 mU/mL,60 mU/mL,80 mU/mL,100 mU/mL和120 mU/mL,然后分别加入10 µL, 100 µg/mL CuSO4溶液,在室温下反应40 min。
6.根据权利要求1或2所述的检测碱性磷酸酶的方法,其特征在于,步骤b具体为:分别在上述步骤a所得混合溶液中加入50µL 10 ng/mL的 HRP溶液室温下反应20 min后,最后加入100 µL 8.3 mM的TMB-H2O2显色溶液,分别检测其吸光度,构建碱性磷酸酶ALP溶液浓度与吸光度的线性关系。