欢迎来到知嘟嘟! 联系电话:13095918853 卖家免费入驻,海量在线求购! 卖家免费入驻,海量在线求购!
知嘟嘟
我要发布
联系电话:13095918853
知嘟嘟经纪人
收藏
专利号: 2016103524262
申请人: 安徽师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-12-08
缴费截止日期: 暂无
价格&联系人
年费信息
委托购买

摘要:

权利要求书:

1.一种检测碱性磷酸酶的方法,其特征在于,所述检测碱性磷酸酶的方法包括以下步骤:

a、将抗坏血酸磷酸酯AAP溶液和一系列浓度梯度的碱性磷酸酶ALP溶液混合在PBS缓冲溶液中,然后加入CuSO4溶液,反应,得到混合溶液;

b、分别在步骤a制备的混合溶液中加入HRP溶液,室温下反应后,加入TMB-H2O2显色溶液,分别检测其吸光度,构建碱性磷酸酶ALP溶液浓度与吸光度的线性关系;

c、利用线性关系,得到待检测碱性磷酸酶ALP溶液浓度。

2.根据权利要求1所述的检测碱性磷酸酶的方法,其特征在于,步骤a中所述一系列浓度梯度的碱性磷酸酶ALP溶液的浓度为:0 mU/mL,10 mU/mL,20 mU/mL,40 mU/mL,60 mU/mL,80 mU/mL,100 mU/mL和120 mU/mL。

3.根据权利要求1或2所述的检测碱性磷酸酶的方法,其特征在于,步骤a中,PBS缓冲溶液的pH为5-9。

4.根据权利要求1或2所述的检测碱性磷酸酶的方法,其特征在于,步骤a中所述反应,具体为在20-25℃下反应5-90min。

5.根据权利要求1或2所述的检测碱性磷酸酶的方法,其特征在于,步骤a具体为:将10 µL 1mg/mL的抗坏血酸磷酸酯AAP溶液和15 µL一系列浓度梯度的碱性磷酸酶ALP溶液混合在100mL pH=7.4的 PBS缓冲溶液中,浓度梯度分别为0 mU/mL,10 mU/mL,20 mU/mL,40 mU/mL,60 mU/mL,80 mU/mL,100 mU/mL和120 mU/mL,然后分别加入10 µL, 100 µg/mL CuSO4溶液,在室温下反应40 min。

6.根据权利要求1或2所述的检测碱性磷酸酶的方法,其特征在于,步骤b具体为:分别在上述步骤a所得混合溶液中加入50µL 10 ng/mL的 HRP溶液室温下反应20 min后,最后加入100 µL 8.3 mM的TMB-H2O2显色溶液,分别检测其吸光度,构建碱性磷酸酶ALP溶液浓度与吸光度的线性关系。