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专利号: 2016103690953
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种抗菌肽,其特征在于,所述抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的抗菌肽,其特征在于,所述抗菌肽是利用蛋白酶将猪溶菌酶水解,然后经分离纯化得到的。

3.一种权利要求1所述的抗菌肽的制备方法,其特征在于,所述方法是将猪溶菌酶进行胰蛋白酶水解得到粗提液,然后经凝胶过滤色谱Superdux Peptide 10/300GL和反相柱C18Phenomenex luna分离纯化得到抗菌十二肽。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述猪溶菌酶由重组大肠杆菌发酵而来,发酵上清液经胰蛋白酶,于35~38℃水解12~16h,酶解结束后煮沸灭酶,酶解液超滤浓缩,得到粗提液。

5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述分离纯化是:(1)将粗提液用磷酸盐缓冲液透析后,用Superdux Peptide 10/300GL凝胶色谱分离,收集对大肠杆菌、铜绿假单细胞菌、肺炎克雷伯氏菌等均有抑菌作用的活性峰V,用截留分子量为3000Da的超滤膜超滤浓缩,取分子量较小的部分透析后冷冻干燥;(2)将上一步得到的冷冻干燥的样品用含0.1%TFA的5%乙腈溶解,并经5%的乙腈平衡的C18Phenomenex luna柱,用浓度为5-50%的线性梯度递增的乙腈洗脱,收集对大肠杆菌、铜绿假单细胞菌、肺炎克雷伯氏菌等均有抑菌作用的活性洗脱峰Ⅱ,并经旋转蒸发和冷冻干燥后,得到产品抗菌十二肽。

6.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,胰蛋白酶相对发酵产物的添加量为15-

30mg/g。

7.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述超滤浓缩是采用截留分子量3000Da的超滤装置浓缩8~10倍。

8.一种权利要求1所述的抗菌肽的应用,是作为饲料添加剂。

9.根据权利要求8所述的应用,是将抗菌肽与猪溶菌酶或其他溶菌酶联合使用。

10.一种抑制革兰氏阴性菌的方法,其特征在于,所述方法是使用权利要求1的抗菌肽。