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专利号: 2016104642567
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种2-苯乙醇的非细胞合成生物学制备方法,其特征在于,是在同一反应体系内通过重组转氨酶Ⅰ ARO8、苯丙酮酸脱羧酶ARO10和醇脱氢酶ADH1组成的共催化体系催化转化L-苯丙氨酸,L-苯丙氨酸经由苯丙酮酸、苯乙醛转化为2-苯乙醇;其中,所述反应体系内,是以L-苯丙氨酸和草酰乙酸为底物,重组酶ARO8、ARO10和ADH1按酶活力以1:0.25:1、1:1:1、

1:0.5:1或1:0.25:2(U/U/U)配比确定,在pH值为5.5~7.5、Mg2+浓度为1.0~5mM的反应体系中,水浴温度为30~40℃条件下,反应转化4~7min后,以等体积的乙腈终止反应,即制得2-苯乙醇。

2.根据权利要求1所述2-苯乙醇的非细胞合成生物学制备方法,其特征在于,所述L-苯丙氨酸和草酰乙酸的摩尔比为0.75:l。

3.根据权利要求1所述2-苯乙醇的非细胞合成生物学制备方法,其特征在于,所述ARO8、ARO10和ADH1的配比为1:0.25:1。

2+

4.根据权利要求1所述2-苯乙醇的非细胞合成生物学制备方法,其特征在于,所述Mg浓度为1.0~2.5mM;优选为1.5mM。

5.根据权利要求1所述2-苯乙醇的非细胞合成生物学制备方法,其特征在于,所述水浴温度为33~40℃;反应时间为5min。

6.根据权利要求1所述2-苯乙醇的非细胞合成生物学制备方法,其特征在于,所述pH值为5.5~6.5;优选所述pH值为6。

7.根据权利要求1所述2-苯乙醇的非细胞合成生物学制备方法,其特征在于,是先将所述重组转氨酶Ⅰ ARO8、苯丙酮酸脱羧酶ARO10和醇脱氢酶ADH1通过共固定方法制得共催化体系Combi-CLEAs,然后利用Combi-CLEAs对L-苯丙氨酸进行催化转化,经由苯丙酮酸、苯乙醛转化为2-苯乙醇。

8.根据权利要求7所述2-苯乙醇的非细胞合成生物学制备方法,其特征在于,所述反应体系内,pH值为5.0、Mg2+浓度为1.0~5mM,水浴温度为40℃,反应转化时间为5min。

9.根据权利要求7所述2-苯乙醇的非细胞合成生物学制备方法,其特征在于,所述共催化体系Combi-CLEAs的制备方法为:将ARO8、ARO10和ADH1按照1:1:1、1:0.5:1或1:0.25:1配比后,经沉淀剂硫酸铵沉淀后形成多酶聚集体,加入戊二醛对多酶聚集体进行交联,制得多酶共固定体系;其中,硫酸铵的饱和度为60~90%,pH值为4~6,戊二醛的加入量按照其终浓度为0.05~0.25%确定。

10.根据权利要求9所述2-苯乙醇的非细胞合成生物学制备方法,其特征在于,所述沉淀剂硫酸铵的饱和度70%;沉淀剂硫酸铵的pH值为5;ARO8、ARO10和ADH1的酶配比为1:0.5:

1;所述戊二醛的加入量按照其终浓度为0.1%确定;所述交联的温度为20~35℃;所述交联的时间为30~150min。