1.一种固定化蜗牛酶制备烟草浸膏的方法,其特征在于具体制备步骤为:
(1)挑选20~30只体长7~8cm的非洲大蜗牛放于不锈钢筛网中,每天用流动去离子水冲洗3~5h,并饥饿处理5~7天以吐出体内杂物,吐杂结束后人工剖出蜗牛消化腺,吸取消化液转存于烧杯中,立即将所得消化液放入卧式离心机,在4~6℃下以10000~12000r/min转速离心分离10~15min,得上层澄清蜗牛酶液,备用;
(2)按摩尔比2:1,将质量浓度为0.3mol/L硫酸亚铁和质量浓度0.2mol/L氯化铁溶液混合后,用质量浓度为3mol/L氢氧化钠溶液调节pH至8.5~9.5,在70~80℃水浴条件下搅拌反应30~40min,得磁流体悬浮液;
(3)向上述磁流体悬浮液中加入其体积1/5质量浓度为10%海藻酸钠溶液,混合得混合液,将其置于磁力搅拌机上,在搅拌状态下加入混合液总质量3~5%失水山梨醇脂肪酸酯,继续搅拌乳化5~10min后,再加入混合液总质量1~3%戊二醛,在30~40℃下反应3~5h;
(4)反应结束后,将反应液倒入等体积的质量浓度为10%氯化钙溶液中,并放入4~6℃冰水浴中静置沉淀过夜,过滤得沉淀物,放入烘箱干燥得磁性海藻酸钠载体,量取300~
500mL备用的上层澄清蜗牛酶液溶于其等体积pH为4.6~5.6醋酸-醋酸钠缓冲液中,加入15~25g磁性海藻酸钠载体,用漩涡振荡仪在30~40℃下以30~50W功率振荡吸附过夜后,过滤并真空冻干后,得固定化蜗牛酶;
(5)称取100~200g烟叶放入气流粉碎机粉碎后过100目标准筛,将过筛烟叶碎片按固液比为1:5加入去离子水中,混合后放入铁锅,在95~100℃下蒸煮40~60min,蒸煮结束后冷却至室温,将蒸煮物转入陶瓷发酵罐中,并加入蒸煮物总质量5~8%固定化蜗牛酶和20~
30mL桂花精油,在35~45℃下保温酶解2~4h;
(6)酶解结束后,过滤得酶解液,并回收固定化蜗牛酶,再向酶解液中加入其体积1~2倍质量浓度为95%乙醇溶液,放入-30~-20℃冰箱中,静置沉淀过夜,沉淀完成后,用卧式离心机以3000~4000r/min转速离心分离10~15min,去除滤渣,得滤液;
(7)将上述滤液放入真空浓缩罐中,降低罐内压力至900~1000Pa,减压浓缩至原质量
1/4,得浓缩液,再转入喷雾干燥机中干燥至其水分含量为3~5%,出料后装罐,即得烟草浸膏。