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专利号: 2016105455638
申请人: 陕西师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种采用层流扩散电喷雾质谱装置获取连续pH下蛋白质构象的方法,所述的层流扩散电喷雾质谱装置是:在第一恒流注射泵(2)上设置有第一进样针(1),在第二恒流注射泵(6)上设置有第二进样针(7),第一恒流注射泵(2)和第二恒流注射泵(6)分别通过连接管与流通阀(5)相联通,流通阀(5)通过连接管与直立层流管(3)相联通,所述的直立层流管(3)的内径为40~100μm,长度为30~80cm,直立层流管(3)通过连接管与质谱检测器(4)相连接,其特征在于它由下述步骤组成:(1)向乙酸铵缓冲液中加入甲酸或氨水,配制成pH值小于7或大于7的乙酸铵缓冲液,然后向第一进样针(1)和第二进样针(7)中分别注入pH值不大于7或不小于7的乙酸铵缓冲液,且第一进样针(1)和第二进样针(7)中缓冲液的pH值不同;

(2)打开流通阀(5),使第一恒流注射泵(2)与直立层流管(3)相连通,待第一进样针(1)中缓冲液充满直立层流管(3)后,立即将流通阀(5)与第二恒流注射泵(6)相连通,使第二进样针(7)中的缓冲液流入直立层流管(3)中,控制第二进样针(7)的进样流速v为2~10μL/min,根据下述公式(1)计算由第二进样针(7)进入直立层流管(3)的缓冲液的最大流速vmax,单位m/s;

式中R为直立层流管的内径,单位m;

第二进样针(7)中的缓冲液沿着直立层流管(3)轴向方向扩散,采用matlab12.0根据下述公式(2)计算层流扩散时间t时,直立层流管(3)上出口截面处溶液中甲酸或NH3·H2O的浓度c(t):式(2)中,c0为第二进样针(7)中甲酸或NH3·H2O的初始浓度,单位mol/L,t的单位为s,x1、k和erf分别根据下述公式(3)~(5)计算:式(3)中L代表直立层流管(3)的长度,单位m;式(4)中D代表扩散系数,D=1.0×10-9m2/s;式(5)中的z根据公式(6)计算:当第一进样针(1)和第二进样针(7)中的缓冲液pH值均不大于7时,采用matlab 12.0根据下述公式(7)计算层流扩散时间t时,直立层流管(3)上出口截面处溶液中H+浓度:式中Ka(HA)、 Ka(HAc)、 分别代表甲酸、NH4+、HAc、NH3的解离常数,Kw代表水的离子积常数,cHA=c(t), 代表乙酸铵的初始浓度;

当第一进样针(1)和第二进样针(7)中的缓冲液pH值均不小于7时,根据下述公式(8)~(9)计算层流扩散时间t时,直立层流管(3)上出口截面处溶液中H+浓度:式(8)中Kw代表水的离子积常数, Ka(HAc)分别代表NH4+、HAc的解离常数,c总为乙酸铵和NH3·H2O浓度的总和,cAc-代表乙酸的初始浓度, 代表乙酸铵的初始浓度;

根据层流扩散时间t时直立层流管(3)上出口截面处溶液中H+浓度,即可得到直立层流管(3)上出口截面处溶液pH随层流扩散时间t的变化曲线;

(3)将待测蛋白质加入第一进样针(1)或第二进样针(7)的缓冲液中,打开流通阀(5),使第一恒流注射泵(2)与直立层流管(3)相连通,待第一进样针(1)中溶液充满直立层流管(3)后,立即将流通阀(5)与第二恒流注射泵(6)相连通,使第二进样针(7)中溶液流入直立层流管(3)中,控制第二进样针(7)的进样流速v与步骤(2)相同,采用质谱检测器(4)记录层流扩散时间t时的离子流色谱图和质谱图,结合直立层流管(3)上出口截面处溶液pH随层流扩散时间t的变化曲线,即可获得连续pH下蛋白质的构象。

2.根据权利要求1所述的采用层流扩散电喷雾质谱装置获取连续pH下蛋白质构象的方法,其特征在于:所述的流通阀(5)为三通阀。

3.根据权利要求1所述的采用层流扩散电喷雾质谱装置获取连续pH下蛋白质构象的方法,其特征在于:所述的质谱检测器(4)是电喷雾液质联用四级杆飞行时间质谱。

4.根据权利要求1所述的采用层流扩散电喷雾质谱装置获取连续pH下蛋白质构象的方法,其特征在于:所述的直立层流管(3)的内径为80μm,长度为50cm。

5.根据权利要求1所述的采用层流扩散电喷雾质谱装置获取连续pH下蛋白质构象的方法,其特征在于:所述的直立层流管(3)的材质为聚醚醚酮。