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专利号: 2016106233095
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种表达外源蛋白的毕赤酵母的诱导表达方法,其包括以下步骤,

步骤1,将含有启动子为PAOX1的外源蛋白表达载体转化至毕赤酵母中,所述毕赤酵母含有突变的毕赤酵母GTP1基因;

步骤2,将步骤1得到的毕赤酵母接种于培养基中培养;

步骤3,离心步骤2中获得的毕赤酵母菌,并重新培养至含有碳源的培养基中培养。

2.根据权利要求1所述的诱导表达方法,其特征在于,所述GTP1基因序列如SEQ ID NO.1所示,编码氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.根据权利要求2所述的诱导表达方法,其特征在于,所述突变为全部或部分序列缺失突变、插入突变、移码突变或点突变。

4.根据权利要求3所述的诱导表达方法,其特征在于,所述的缺失突变为缺失GTP1基因的整个开放阅读框或者部分序列突变。

5.根据权利要求4所述的诱导表达方法,其特征在于,所述的GTP1体外缺失片段序列如SEQ ID NO:3所示。

6.根据权利要求5所述的诱导表达方法,其特征在于,所述的毕赤酵母菌株于2016年06月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCC No.12718。

7.根据权利要求1所述的毕赤酵母的诱导表达方法,其特征在于,步骤2中所述培养基为YPD液体培养基,于30℃、230r/min培养至OD600为2~6。

8.根据权利要求1所述的毕赤酵母的诱导表达方法,其特征在于,所述碳源为甘油、甲醇或甘油与甲醇的混合物。

9.根据权利要求8所述的毕赤酵母的诱导表达方法,其特征在于,诱导所述毕赤酵母表达外源蛋白的碳源为甘油,所述甘油添加后的体积浓度B2的范围为0<B2≤0.5%。

10.根据权利要求8所述的毕赤酵母的诱导表达方法,其特征在于,诱导所述毕赤酵母表达外源蛋白的碳源为甲醇,所述甲醇添加后的体积浓度A1的范围为0<A1≤2%。

11.根据权利要求8所述的毕赤酵母的诱导表达方法,其特征在于,诱导所述毕赤酵母表达外源蛋白的碳源为甲醇与甘油的混合物,所述甲醇添加后的体 积浓度A2的范围为0<A2≤2%,所述甘油添加后的体积浓度B1的范围为0<B1≤0.5%。

12.根据权利要求11所述的毕赤酵母的诱导表达方法,其特征在于,所述甲醇添加后的体积浓度A2为1%,所述甘油添加后的体积浓度B1为0.25%。

13.根据权利要求1所述的毕赤酵母的诱导表达方法,其特征在于,所述碳源的添加方式为,以体积浓度计,0~24h,向液体培养基中添加1%甘油;24h~48h,向液体培养基中添加1%甲醇;48h~72h,向液体培养基中添加1%甲醇和0.25%甘油;72h~96h,向液体培养基中添加1%甲醇和0.25%甘油。