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专利号: 2016106592473
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种从白酒发酵酒醅中提取总RNA的方法,其特征在于,所述方法的步骤如下:(1)将酒醅样品用无菌PBS缓冲液悬浮并加入玻璃珠漩涡震荡;

(2)低速离心后取上清,沉淀用PBS缓冲液重复洗涤、低速离心,合并上清;

(3)将步骤(2)得到的上清高速离心,取沉淀,冷冻;

(4)将由15-25份月桂酸钠抽提缓冲液、15-25份Trizol、0.5-1.5份巯基乙醇和0.5-1.5份二硫苏糖醇组成的抽提混合液,轻轻混匀,放置冰上,所述月桂酸钠抽提缓冲液:pH 8.0的Tris-HCl 0.1mol/L,NaCl 0.1mol/L,pH8.0的EDTA 0.02mol/L,月桂酸钠10g/L,pH 8.0;

(5)将步骤(3)的冷冻的样品置于预冷的研钵中,倒入液氮,迅速研磨至粉末,期间不断加入液氮,防止研磨过程中RNA被降解;

(6)将研磨好的粉末移入装有抽提混合液的Rnase-free离心管中,反复缓慢的摇匀,所述研磨好的粉末与抽提混合液是按照m/V为1:8-1:12的比例添加;

(7)高速离心,吸取上清液置于Rnase-free离心管中;

(8)加入0.8-1.2倍体积的氯仿,盖好管盖,轻轻混匀,放置冰上;

(9)高速离心,吸取上清液置于Rnase-free离心管中;

(10)加入0.5-1倍体积的异丙醇,混匀,冰上放置;

(11)高速离心,弃去上清液;

(12)加入体积浓度为70-80%的乙醇洗涤沉淀,高速离心2-5min后弃去上清液;

(13)先室温放置1-2min,加入30-50μL RNase-Free ddH2O,即得到溶解的RNA,所述低速离心是指转速为450-550rpm,所述高速离心是指转速为11000-13000rpm,步骤(7)、(9)、(11)或(12)所述的离心是在0-4℃的条件下进行的,步骤(3)、(7)、(9)或(11)所述的离心的时间为8-15min。