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专利号: 2016106750710
申请人: 赣南师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 染料;涂料;抛光剂;天然树脂;黏合剂;其他类目不包含的组合物;其他类目不包含的材料的应用
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种具有下式结构的近红外荧光染料的应用,其特征在于:该近红外荧光染料可以用于血吸虫成虫荧光标记成像;

荧光标记方法包括如下步骤:

(1)获取血吸虫尾蚴:尾蚴从感染毛蚴的阳性的钉螺得到,取阳性螺放入清水中,在白炽灯下光照2小时逸出新鲜尾蚴;

(2)小鼠感染:将六周龄雌性小鼠剪去小鼠腹部体毛,取温水湿润小鼠腹部皮肤,并将含有50条尾蚴的盖玻片贴于小鼠去毛的腹部皮肤上,保持20分钟使尾蚴穿透小鼠皮肤进行感染;

(3)获取血吸虫成虫:将感染后的小鼠饲养6周后,使其颈部脱臼致死,严格按照无菌操作要求,依次剖开腹部皮肤、腹膜,采取灌注法于肝门-肠系膜静脉中收集成虫;将收集到的成虫在生理盐水中漂洗3次后分配到培养皿中,加入RPMI-1640细胞培养液培养2小时后,镜检筛选活性良好的虫体用于荧光成像;

(4)血吸虫成虫荧光成像:荧光染料用二甲基亚砜溶解准确配制成1mmol的母液,然后再用PBS缓冲液稀释成5μM的稀释液;移取200μL稀释液加入到培养皿中,用镊子挑取成虫加入到荧光染料稀释液中,于室温孵育5分钟至6小时后,将成虫转移到荧光成像器皿,在

635nm激发下共聚焦荧光显微镜观察成虫的荧光标记情况,采集650-750nm的荧光信号进行荧光成像。