1.一种用于检测P53基因的探针,其特征是:由一条单链DNA辅助探针S1和一条单链DNA捕获探针S2组成,所述S1的DNA链序列为:5’-Fc-CTC TCA GTG ATT TTT TTA GTG AGA GAG-(CH2)6-SH-3’,所述S2的DNA链序列为:5’-MB-TCA CTG AGT CTT CCA GTG TGA TGA TCA CT-
3’。
2.权利要求1所述用于检测P53基因的探针在制备检测P53基因的修饰电极中的应用。
3.一种用于检测P53基因的修饰电极的制备方法,其特征是:步骤如下:(1)辅助探针S1在含有三(2-羧乙基)膦的Tris-HCl缓冲液中加热,退火获得单链辅助探针S1的Tris-HCl缓冲液;
(2)将打磨、清洗干燥后的金电极浸在步骤(1)得到的辅助探针S1的Tris-HCl缓冲液中,通过自组装的方式将辅助探针S1修饰到金电极表面,得到S1/GE修饰电极;
(3)将步骤(2)所得电极浸在捕获探针S2的Tris-HCl缓冲液,加热,使捕获探针S2与辅助探针S1结合,在金电极表面形成双发夹结构,得到S2/S1/GE修饰电极;
所述步骤(1)中含有三(2-羧乙基)膦的Tris-HCl缓冲液为含有110-150mM的三羟甲基氨基甲烷,100-120mM的NaCl,1-10mM的MgCl2,9-11mM的三(2-羧乙基)膦的混合液,pH为
7.4-7.8;所述S1与S2如权利要求1中所述。
4.如权利要求3所述的制备方法,其特征是:所述步骤(1)中加热具体为:90℃水浴加热
4-6分钟。
5.如权利要求3所述的制备方法,其特征是:所述步骤(2)中打磨、清洗干燥的具体步骤为:将金电极用氧化铝粉末打磨抛光成镜面,再分别经乙醇、二次蒸馏水超声清洗20-60s,氮气干燥,得到清洁金电极。
6.如权利要求3所述的制备方法,其特征是:所述步骤(2)中将辅助探针S1修饰到金电极表面的条件为:反应温度为22-25℃, 反应时间为10-24小时,辅助探针S1缓冲液的浓度为40-50mM。
7.如权利要求3所述的制备方法,其特征是:所述步骤(3)中加热具体为:35-37℃水浴加热1-3小时,所述捕获探针S2的浓度为35-50mM。
8.权利要求3-7任一所述的制备方法制备得到的修饰电极在制备用于检测P53基因的电化学传感器中的应用。
9.一种检测肿瘤抑制基因p53的方法,其特征是:步骤如下:
(1)将S2/S1/GE修饰电极在Tris-HCl缓冲液中水浴加热后,与甘汞参比电极和铂丝对电极构成三电极系统,在Tris-HCl缓冲液中进行DPV检测,得到亚甲基蓝的峰电流I0(MB),二茂铁的峰电流为I0(Fc);
(2)将S2/S1/GE修饰电极与不同浓度的P53基因缓冲液在加热的条件下进行识别后用Tris-HCl缓冲液冲洗,之后与甘汞参比电极和铂丝对比电极构成三电极系统,在Tris-HCl缓冲液中进行DPV检测,以得到的二茂铁峰电流比亚甲基蓝的峰电流的值:I=IFc/IMB;以I对P53基因浓度的对数做线性回归方程,得工作曲线;
(3)在对实际样品进行检测时,采用同样方法对待测样品中的P53基因进行DPV检测,求得二茂铁峰电流对亚甲基蓝峰电流的比值,后代入线性回归方程即得样品中P53基因的浓度;
所述步骤(1)、(2)中的S2/S1/GE修饰电极为由权利要求3-7任一所述的制备方法制备得到。
10.如权利要求9所述的方法,其特征是:所述步骤(1)、(2)中,Tris-HCl缓冲液为含有
110-150mM的Tris-HCl,100-120mM的NaCl,1-10mM的MgCl2的混合液,其pH为7.4-7.8。
11.如权利要求9所述的方法,其特征是:所述步骤(1)中,水浴加热时间为15-30分钟。
12.如权利要求9所述的方法,其特征是:所述步骤(2)中,P53基因缓冲液为含有110-
150mM的Tris-HCl,100-120mM的 NaCl,1-10mM的MgCl2以及10-12-10-8MP53基因的混合液,其pH为7.4-7.8。
13.如权利要求9所述的方法,其特征是:所述步骤(2)中,加热是水浴加热,反应温度为
35-37℃,反应时间为15-30分钟。