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专利号: 2016108108390
申请人: 常熟理工学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于CD光谱检测技术的铅离子检测方法,其特征在于包括以下步骤:(1)设计、合成寡核苷酸片段:

设计能够对铅离子特异性识别且具有GR-5DNA酶剪切作用的DNA1;制备合成具有巯基修饰的DNA2,DNA1、DNA2序列:DNA1:5’-SH-GCGCCTTACCACTrAGGAAGAGATGATT-3’DNA2:5’-SH-CGGTAATCATCTCTGAAGTA-3’(2)根据柠檬酸钠法合成金纳米颗粒溶液:Au NP1=35±5nm、Au NP2=20±3nm;

(3)金纳米颗粒二聚体的组装;

1)将上述制备的金纳米颗粒溶液和100μM的DNA1溶液在室温下反应3h,然后加入2M的氯化钠溶液至终浓度为0.05M,混合均匀,并在不断的摇晃下反应12h;上述金纳米颗粒溶液和DNA1溶液的体积比为50:1;

2)将上述制备的金纳米溶液和100μM的DNA2溶液在室温下反应3h,然后加入2M的氯化钠溶液至终浓度为0.05M,混合均匀,并在不断的摇晃下反应12h;上述金纳米溶液和DNA2溶液的体积比为50:1;

3)上述反应液分别在3000rpm下离心10min,去除未偶联上的DNA,并将混合液分别命名为NP1-DNA1和NP2-DNA2;

4)将NP1-DNA1和NP2-DNA2按照1:1的体积混合,室温下孵育过夜,离心重悬在超纯水中,制得金纳米颗粒二聚体的组装溶液;

(4)在金纳米颗粒二聚体的组装溶液中加入待检测的样品,反应30min,通过CD光谱检测铅离子。

2.根据权利要求1所述的一种基于CD光谱检测技术的铅离子检测方法,其特征在于基于下列方程确定样品中铅离子的浓度:y=8.615LOG(x)–16.339,535nm处的CD信号强度值作为纵坐标y,铅离子浓度为横坐标x。

3.根据权利要求2所述的一种基于CD光谱检测技术的铅离子检测方法,其特征在于所述方程标准曲线根据以下步骤建立:取金纳米颗粒二聚体的组装溶液100μL,分别加入0、0.5、1、5、10、20、50ng/mL浓度的铅离子溶液,反应30min,对样品进行CD光谱表征,建立随着铅离子的浓度增加而成比例增强的CD光谱信号传感器,利用这一特性,设置铅离子的浓度为0.5-50ng/mL,以535nm处的CD信号强度值作为纵坐标y,铅离子浓度为横坐标x建立标准曲线,方程为y=8.615LOG(x)–

16.339。

4.根据权利要求1所述的一种基于CD光谱检测技术的铅离子检测方法,其特征在于铅离子根据以下方法进行特异性测定:

2+

取小离心管分别加入金纳米二聚体的组装溶液100μL,然后向各离心管中分别加Pb 、Hg2+、Cu2+、Cd2+、Ni2+、Mn2+,使加入金属离子的最终浓度为50ng/mL,混合并在室温下反应30分钟,以535nm处的CD信号强度值绘制特异性柱状图,从而测定铅离子的特异性。