1.一种马铃薯松散型胚性愈伤组织的诱导方法,其特征在于:步骤如下:
⑴马铃薯外植体的准备
选择带有外皮的部分;并不要选择带芽的部位进行消毒处理;
⑵马铃薯松软愈伤组织的诱导
将消毒处理好马铃薯外植体接种到事先配制好的1/2-1/4MS+1.0-2.0mg/L2,4-D+15-
20g/L蔗糖的培养基上;进行松软愈伤组织的诱导培养;每个容器中加入30-50ml培养基;培养条件为:24-25℃,24h光照;光照强度为1000Lux;经过30-40d培养;在马铃薯切块的外围就可以诱导出质地柔软、浅白色的愈伤组织;
⑶马铃薯松散型愈伤组织的诱导
将诱导出的马铃薯松软愈伤组织转移到MS+0.5-1.0mg/LBA+0.25-0.5mg/L2,4-D+30g/L蔗糖的培养基上进行松散型愈伤组织的诱导;转移愈伤组织过程中要小心,否则会弄伤软的愈伤组织;使得愈伤组织过小而死亡;培养中10-14d继代一次;在继代过程中应尽可能选择质地较硬的愈伤组织;将变色、细软的愈伤组织在继代过程中逐渐淘汰;每个容器中加入
20-40ml培养基;培养条件为:23-24℃,24h光照;光照强度为2000-2500Lux;经过3-5次继代培养;即可诱导出生长速度适中、质地较硬、结构松散的浅绿色愈伤组织;
⑷马铃薯松散型胚性愈伤组织的诱导
将步骤⑶中诱导出的马铃薯松散型愈伤组织在超净台中取出;转接到MS+1.0-1.5mg/LBA+0.5-1.0mg/L2,4-D+30g/L蔗糖的培养基上进行松散型胚性愈伤组织的诱导;在愈伤组织培养过程中;每15-20d继代一次;继代时应选择结构松散、颜色浅绿色并呈现颗粒状的愈伤团保留下来;同时要结合显微镜进行镜检;进一步确定愈伤组织的胚性;经过5-8次继代;
大约100-120d时间;即可诱导出马铃薯松散型胚性愈伤组织;诱导时采用100ml三角瓶;由于继代时间较长;本步骤要求在每个三角瓶中加入40ml的培养基;培养条件为:21-22℃,
24h光照;光照强度为2500-3000Lux。
2.根据权利要求1所述的马铃薯松散型胚性愈伤组织的诱导方法,其特征在于:所述步骤⑴的具体操作如下:取马铃薯块茎在自来水中反复冲洗;用解剖刀切取马铃薯块茎;要选择带有外皮的部分;并不要选择带芽的部位;将切下的马铃薯块茎放到超净台中;再用解剖刀切成直径大约为5-10mm的小块;然后采用70%的乙醇浸泡块茎30S;再用40%的安替福民水溶液进行表面消毒处理;消毒时间为20Min;消毒结束后;将块茎在无菌水中反复冲洗5次;每次10Min;然后用无菌的吸水纸将多余的水分吸干;并用解剖刀将块茎最外部的一层组织切除。