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专利号: 2016109285763
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种咖啡酸的生物合成方法,其特征在于,以一种共表达酪氨酸苯裂合酶EhTPL和酪氨酸氨基裂合酶TcXAL的重组大肠杆菌,催化底物邻苯二酚、丙酮酸钠和氯化铵,合成咖啡酸。

2.根据权利要求1所述的一种咖啡酸的生物合成方法,其特征在于,所述的酪氨酸苯裂合酶EhTPL来源于草生欧文氏菌(Erwinia herbicola),其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的一种咖啡酸的生物合成方法,其特征在于,所述的酪氨酸氨基裂合酶TcXAL来源于皮状丝孢酵母(Trichosporon cutaneum),其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.根据权利要求1~3任一所述的一种咖啡酸的生物合成方法,其特征在于,所述的大肠杆菌为大肠杆菌BL21(DE3)。

5.根据权利要求1~3任一所述的一种咖啡酸的生物合成方法,其特征在于,所用的表达载体为pET28a(PB)。

6.根据权利要求1~5任一所述的一种咖啡酸的生物合成方法,其特征在于,所述重组大肠杆菌含有通过pET28a(PB)以假操纵子的结构顺序表达EhTPL和TcXAL基因的重组质粒pTXe1。

7.根据权利要求1~5任一所述的一种咖啡酸的生物合成方法,其特征在于,所述重组大肠杆菌含有通过pET28a(PB)以单顺反子的结构顺序表达EhTPL和TcXAL基因的重组质粒pTXe3。

8.根据权利要求6或7所述的一种咖啡酸的生物合成方法,其特征在于,全细胞转化体系中重组大肠杆菌的浓度是OD600=18±1;底物为10–100mM的邻苯二酚,NH4Cl、丙酮酸钠和邻苯二酚的浓度的比例为13:1:1;反应温度为25–42℃。

9.根据权利要求8所述的一种咖啡酸的生物合成方法,其特征在于,全细胞转化体系中重组大肠杆菌的浓度是OD600=18±1,转化体系中还含有0.65M NH4Cl、50mM丙酮酸钠和

50mM邻苯二酚作为底物,在37℃、220rpm条件下进行全细胞转化。

10.一种重组大肠杆菌,其特征在于,共表达酪氨酸苯裂合酶EhTPL和酪氨酸氨基裂合酶TcXAL,通过pET28a(PB)以假操纵子或单顺反子的结构顺序表达EhTPL和TcXAL基因。