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专利号: 2016109650413
申请人: 河南科技大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种树木茎干组织的石蜡切片方法,其特征在于:包括以下步骤:(1)组织固定:

将树木茎干组织浸于固定液中固定;

(2)一次软化:

将固定后的组织浸于体积比1:1的70%乙醇与甘油的软化液中软化;

(3)组织脱水:

将软化后的组织依次浸于浓度梯度为35%、70%、90%、95%、100%的乙醇中脱水,每个梯度至少处理40min;

(4)组织透明:

将脱水后的组织先浸于体积比1:1的100%乙醇与二甲苯的混合液中,再浸于二甲苯中透明;

(5)浸蜡和包埋:

将透明后的组织浸于液体石蜡中浸蜡,浸蜡后包埋;

(6)二次软化:

将包埋后的组织浸于水中半小时至一周软化;

(7)切片、展片、粘片和烤片;

(8)脱蜡和复水:

切片组织用二甲苯脱蜡处理后,再依次用浓度梯度为100%、95%、70%的乙醇和水复水;

(9)染色和封片:

采用番红-固绿染色法染色,封片即可。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中茎干组织取自树木胸径处,组织大小为直径1.5~2.5mm,长度15~20mm。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中固定液由体积比为9:0.5:0.5的

70%乙醇、甲醛和乙酸组成。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(2)中软化的时间为1~4周。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(3)中组织脱水的具体操作为:

1)在35%乙醇中保持1h;

2)在70%乙醇中保持1h;

3)在90%乙醇中保持50min;

4)重复步骤3)中操作1次;

5)在95%乙醇中保持50min;

6)在100%乙醇中保持40min;

7)重复步骤6)中操作1次。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(4)中组织透明的具体操作为:

1)在体积比1:1的100%乙醇与二甲苯的混合液中保持40min;

2)在二甲苯中保持40min;

3)重复步骤2)中操作1次。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(5)中浸蜡的具体操作为:

1)在液体石蜡中保持20min;

2)在液体石蜡中保持30min;

3)重复步骤2)中操作1次。

8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(8)中脱蜡的具体操作为:

1)在二甲苯中保持5~10min;

2)重复步骤1)中操作3次。

9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(8)中复水的具体操作为:

1)在100%乙醇中保持20s;

2)在95%乙醇中保持20s;

3)在70%乙醇中保持20s;

4)在蒸馏水中保持20s。

10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(9)中染色的具体操作为:

1)在1%番红水溶液中保持15~20min;

2)在蒸馏水中保持10s;

3)在70%乙醇中保持10s;

4)重复步骤3)中操作3次;

5)在0.5%固绿的95%乙醇溶液中保持30s;

6)在95%乙醇中保持10s;

7)重复步骤6)中操作1次;

8)在无水乙醇中保持10s;

9)重复步骤8)中操作1次。