1.一种树木茎干组织的石蜡切片方法,其特征在于:包括以下步骤:(1)组织固定:
将树木茎干组织浸于固定液中固定;
(2)一次软化:
将固定后的组织浸于体积比1:1的70%乙醇与甘油的软化液中软化;
(3)组织脱水:
将软化后的组织依次浸于浓度梯度为35%、70%、90%、95%、100%的乙醇中脱水,每个梯度至少处理40min;
(4)组织透明:
将脱水后的组织先浸于体积比1:1的100%乙醇与二甲苯的混合液中,再浸于二甲苯中透明;
(5)浸蜡和包埋:
将透明后的组织浸于液体石蜡中浸蜡,浸蜡后包埋;
(6)二次软化:
将包埋后的组织浸于水中半小时至一周软化;
(7)切片、展片、粘片和烤片;
(8)脱蜡和复水:
切片组织用二甲苯脱蜡处理后,再依次用浓度梯度为100%、95%、70%的乙醇和水复水;
(9)染色和封片:
采用番红-固绿染色法染色,封片即可。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中茎干组织取自树木胸径处,组织大小为直径1.5~2.5mm,长度15~20mm。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中固定液由体积比为9:0.5:0.5的
70%乙醇、甲醛和乙酸组成。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(2)中软化的时间为1~4周。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(3)中组织脱水的具体操作为:
1)在35%乙醇中保持1h;
2)在70%乙醇中保持1h;
3)在90%乙醇中保持50min;
4)重复步骤3)中操作1次;
5)在95%乙醇中保持50min;
6)在100%乙醇中保持40min;
7)重复步骤6)中操作1次。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(4)中组织透明的具体操作为:
1)在体积比1:1的100%乙醇与二甲苯的混合液中保持40min;
2)在二甲苯中保持40min;
3)重复步骤2)中操作1次。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(5)中浸蜡的具体操作为:
1)在液体石蜡中保持20min;
2)在液体石蜡中保持30min;
3)重复步骤2)中操作1次。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(8)中脱蜡的具体操作为:
1)在二甲苯中保持5~10min;
2)重复步骤1)中操作3次。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(8)中复水的具体操作为:
1)在100%乙醇中保持20s;
2)在95%乙醇中保持20s;
3)在70%乙醇中保持20s;
4)在蒸馏水中保持20s。
10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(9)中染色的具体操作为:
1)在1%番红水溶液中保持15~20min;
2)在蒸馏水中保持10s;
3)在70%乙醇中保持10s;
4)重复步骤3)中操作3次;
5)在0.5%固绿的95%乙醇溶液中保持30s;
6)在95%乙醇中保持10s;
7)重复步骤6)中操作1次;
8)在无水乙醇中保持10s;
9)重复步骤8)中操作1次。