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专利号: 2016110167448
申请人: 西北师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于卟啉化合物开关型荧光检测谷胱甘肽的方法,其特征在于,该检测方法具体按以下步骤进行:

1)将250mL丙酸油浴加热至微沸后,加入10mL苯甲醛,得原料液;

将7mL吡咯减压蒸馏后,溶于30mL丙酸中,得滴加液;

2)将滴加液缓慢滴入原料液,边滴加边回流,滴加完毕后,继续回流1h后停止加热,冷却至室温,静置;抽滤,用无水乙醇及二次水各洗涤2~3次,烘干,得紫色固体;拌样,用柱层析法纯化,洗脱剂为二氯甲烷和石油醚的混合物;旋蒸、烘干得四苯基卟啉;

3)用3~5mL氯仿溶解200mg四苯基卟啉,慢慢加入10mL质量分数≥70%的H2SO4溶液,磁力搅拌下加热到95℃,之后恒温回流4h,得澄清液,冷却至室温,将该澄清液滴入200mL摩尔体积浓度为1mol/L的NaHCO3溶液中,滴加的同时进行搅拌,得到溶液,冰水浴冷却后过滤,蒸干滤过液,用150mL甲醇溶解,过滤并收集滤液;重复上述操作2~3次,合并滤液,加入

100mL异丙醇进行重结晶,过滤,真空干燥得卟啉化合物;

4)将0.0001g卟啉化合物溶于25mL超纯水中,配制成物质的量浓度为1×10-4mol/L的卟啉溶液;

5)移取500uL 步骤4中所配制的卟啉溶液于2mL样品管中,加入1mL摩尔体积浓度

0.5mol/L的PBS缓冲溶液,加入38uL浓度为2.24mM的Hg2+溶液,静置5min,制得TPPS4-Hg2+荧光探针;

6)取1mL步骤5中得到的TPPS4-Hg2+荧光探针,先加入0.5uL的谷胱甘肽储备液,检测荧光探针荧光强度的变化,然后再加入0.5uL谷胱甘肽储备液,检测荧光探针荧光强度的变化,重复此过程直到荧光探针的荧光强度不再变化为止,通过荧光光谱仪检测荧光发射光谱。

2.根据权利要求1所述的基于卟啉化合物开关型荧光检测谷胱甘肽的方法,其特征在于,所述步骤6中采用荧光光谱仪检测荧光发射光谱,检测时的激发波长515nm,狭缝宽度

5nm×5nm。

3.根据权利要求1所述的基于卟啉化合物开关型荧光检测谷胱甘肽的方法,其特征在于,完成谷胱甘肽的检测后,采用TD-DFT/B3LYP/6-31G(d)及LANL2DZ基组计算TPPS4与Hg2+发生发应后生成产物的激发态的性质;计算时采用Gaussian09 软件包。