欢迎来到知嘟嘟! 联系电话:13095918853 卖家免费入驻,海量在线求购! 卖家免费入驻,海量在线求购!
知嘟嘟
我要发布
联系电话:13095918853
知嘟嘟经纪人
收藏
专利号: 2016110208575
申请人: 陕西师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
价格&联系人
年费信息
委托购买

摘要:

权利要求书:

1.连接酶在检测N6甲基腺嘌呤中的应用,其特征在于:

(1)根据含有待测位点的RNA序列设计合成左探针、右探针,其中左探针是DNA探针,其从5′端到3′端依次为检测识别区、PCR引物区,且其序列的5′端修饰磷酸基团,右探针是DNA探针,其从5′端到3′端依次为PCR引物区、检测识别区,所述左探针和右探针的检测识别区是与含有待测位点的RNA序列互补的8~40个碱基序列;

(2)将步骤(1)左探针、右探针的检测识别区与含有待测位点的RNA序列杂交,然后加入T3 DNA连接酶或T4 RNA连接酶2进行连接反应;

(3)以步骤(2)的连接产物为模板进行聚合酶链式反应,并加入SUPER Green I荧光染料,实时检测荧光信号,根据实时荧光曲线计算出待测位点腺嘌呤的含量;

(4)在待测位点附近选择一个不含N6甲基腺嘌呤的腺嘌呤位点作为参比位点,根据含有参比位点的RNA序列按照步骤(1)设计合成左探针、右探针;

(5)将步骤(4)左探针、右探针的检测识别区与含有参比位点的RNA杂交,然后通过T3 DNA连接酶或T4 RNA连接酶2将左探针和右探针连接起来;

(6)以步骤(5)的连接产物为模板进行聚合酶链式反应,并加入SUPER Green I荧光染料,实时检测荧光信号,根据实时荧光曲线计算出参比位点腺嘌呤的含量;

(7)根据步骤(6)计算出的参比位点腺嘌呤的含量减去步骤(3)计算出的待测位点腺嘌呤的含量,得到待测位点N6甲基腺嘌呤的含量,待测位点N6甲基腺嘌呤的含量除以待测位点腺嘌呤和N6甲基腺嘌呤的总和,就得到N6甲基腺嘌呤的百分比含量。

2.根据权利要求1所述的连接酶在检测N6甲基腺嘌呤中的应用,其特征在于:在步骤(1)和(4)中,所述的右探针是3′端修饰两个RNA碱基的DNA探针。

3.根据权利要求1所述的连接酶在检测N6甲基腺嘌呤中的应用,其特征在于:在步骤(1)和(4)中,所述左探针和右探针的检测识别区是与含有待测位点或含有参比位点的RNA序列互补的10~20个碱基序列。