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专利号: 2016110457525
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种绿侧花海葵抗前列腺癌寡肽的制备方法,其特征在于,步骤如下:

(1)样品预处理:新鲜野生绿侧花海葵经预处理后得海葵肉浆;

(2)酶解:按照每克海葵肉浆加4-5mL纯净水的配比,将海葵肉浆与纯净水混匀,调节pH=10-11,按照每克海葵肉浆加2000-2500U的加酶量加入碱性蛋白酶,35-45℃酶解4-6小时得酶解液;

(3)超滤:酶解液灭活,离心,取上清液,经超滤获得分子量小于8kd的活性组分;

(4)阴离子交换层析:分子量小于8kd的活性组分经DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析,洗脱,于280nm检测吸光度,并根据吸光度曲线合并洗脱峰,对收集得到的各洗脱峰产物冷冻干燥,MTT法筛选对前列腺癌细胞DU-145增殖抑制率最高的阴离子交换层析产物;

(5)SephadexG25凝胶层析:将对前列腺癌细胞DU-145增殖抑制率最高的阴离子交换层析产物采用G-25凝胶层析继续分离纯化,超纯水洗脱,于280nm检测吸光度,并根据吸光度曲线合并洗脱峰,对收集得到的各洗脱峰产物冷冻干燥,MTT法筛选对前列腺癌细胞DU-145增殖抑制率最高的Sephadex G25凝胶层析产物;

(6)反相高效液相色谱分离纯化:对前列腺癌细胞DU-145增殖抑制率最高的Sephadex G25凝胶层析产物经滤膜过滤后用反相高效液相色谱分离纯化,最终获得绿侧花海葵抗前列腺癌寡肽。

2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)样品预处理具体为:取新鲜野生绿侧花海葵置于室温干净海水中饲养一天,清洗除去杂质,用剪刀从中间剖开,置于烧杯中,并加水覆盖,置于-20℃冰箱中冷冻12h,再置于室温自然解冻,反复三次,挤出触手毒液,然后用自来水冲洗至得到白色海葵肉,白色海葵肉进行匀浆,将匀浆浸泡于异丙醇中去脂,每4h更换一次,连续换3次,去脂结束后用纯水将异丙醇冲洗干净,然后置于通风橱风中风干至无水滴得海葵肉浆。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于,步骤(4)分别以纯净水、0.1mol/L、

0.3mol/L、0.5mol/L、0.8mol/L的NaCl溶液梯度洗脱,各梯度的洗脱速度为1mL/min。

4.根据权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于,步骤(5)的超纯水的洗脱速度为

1mL/min。

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