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专利号: 2016111583722
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种咖啡酸的高效全细胞转化方法,其特征在于,以表达酪氨酸氨基裂合酶RgTAL的重组大肠杆菌,全细胞催化左旋多巴转化合成咖啡酸。

2.根据权利要求1所述的一种咖啡酸的生物转化方法,其特征在于,所述的酪氨酸氨基裂合酶RgTAL的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1或2所述的一种咖啡酸的生物合成方法,其特征在于,所述的大肠杆菌为大肠杆菌BL21(DE3)。

4.根据权利要求1~3任一所述的一种咖啡酸的生物合成方法,其特征在于,所用的表达载体为pET-28a(PB)。

5.根据权利要求4所述的一种咖啡酸的生物合成方法,其特征在于,编码酪氨酸氨基裂合酶的基因RgTAL通过限制性酶切位点Bam HI/Hind III亚克隆至表达载体pET-28a(PB)。

6.根据权利要求1~5任一所述的一种咖啡酸的生物合成方法,其特征在于,全细胞转化体系的反应介质为10-200mM的磷酸盐缓冲液,全细胞转化体系中重组大肠杆菌的浓度为OD600=20±1,底物浓度范围为0.01-10g/L,所述的全细胞转化体系的pH范围为6.0-9.0,反应温度范围为25-42℃。

7.根据权利要求6所述的一种咖啡酸的生物合成方法,其特征在于,所述的反应介质为

10-200mM的磷酸盐缓冲液。

8.根据权利要求6所述的一种咖啡酸的生物合成方法,其特征在于,全细胞转化的反应介质为50mM的磷酸盐缓冲液,全细胞转化体系中重组大肠杆菌的浓度为OD600=20±1,底物浓度为1g/L,所述的反应体系的pH范围为7.5,反应温度范围为37℃。

9.一种重组大肠杆菌,其特征在于,表达酪氨酸氨基裂合酶RgTAL。

10.根据权利要求9所述的一种重组大肠杆菌,其特征在于,所述的酪氨酸氨基裂合酶RgTAL的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,表达载体为pET-28a(PB)。