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专利号: 2016111860227
申请人: 桂林医学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法,其特征在于:包括高效液相色谱仪进行梯度洗脱,然后通过质谱进行测定;所述的高效液相色谱条件为:色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填料;

检测波长:280nm;

流动相:流动相A为0.1%甲酸溶液,流动相B为甲醇,采用梯度洗脱,流动相比例均为体积百分比体积,洗脱程序如下:

0-6min,流动相A为95%→90%,流动相B为5%→10%;

6-10min,流动相A为90%→86%,流动相B为10%→14%;

10-18min,流动相A为86%→70%,流动相B为14%→30%;

18-25min,流动相A为70%→50%,流动相B为30%→50%;

25-29min,流动相A为50%→0%,流动相B为50%→100%;

29-32min,流动相A为0%,流动相B为100%。

2.如权利要求1所述的小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法,其特征在于:所述的质谱测定条件包括

采用UPLC-QQQMS,接有电喷雾离子源,负离子化模式;

喷雾电压45psi;

干燥气体氮气;干燥气流量11L/min;干燥气体温度350℃;

毛细管电压:负离子3.5kV;

扫描范围:m/z50-1000。

3.如权利要求2所述的小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法,其特征在于:采用选择离子监控模式优化待测化合物电压,子离子扫描模式:优化子离子、定性离子及二者碰撞能量,多反应监测模式优化各组分分离洗脱条件,最后采用动态多反应监测模式高选择性地分析测定各组分,具体质谱条件优化为:

4.如权利要求3所述的小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法,还包括供试品溶液的制备,其特征在于,所述的供试品溶液的制备方法包括以下步骤:取小叶榕干浸膏提取物,加入10%乙腈,超声提取,摇匀,微孔滤膜过滤,取续滤液作为供试品溶液。

5.如权利要求4所述的小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法,其特征在于,所述超声功率为250W,频率为30-50kHz,超声时间为30-60min。

6.如权利要求3所述的小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法,还包括对照品溶液的制备,其特征在于,所述的对照品溶液制备方法包括以下步骤:分别精密称取没食子酸、原儿茶酸、5-二咖啡酰奎宁酸、儿茶素、咖啡酸、绿原酸、表儿茶酸、荭草素、牡荆素、异荭草素、芦丁对照品,置于量瓶中,用70%甲醇定容,配成混标溶液,备用。

7.如权利要求所述的小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法,其特征在于:还包括标准指纹图谱的建立方法,包括以下步骤:取10批小叶榕干浸膏,配置成供试品溶液,将这10批供试品溶液经过HPLC-MS测定,获得10批样品的MRM图,将其中异牡荆素峰设为参照峰,计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积,以此获得以18个共有峰峰形成的指纹图谱。

8.如权利要求7所述的小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法,其特征在于:所述18个共有峰的峰面积之和占所有峰面积之和大于90%。

9.如权利要求1所述的小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法,其特征在于:高效液相梯度洗脱时,流速为0.3-0.6ml/min,柱温为20-30℃。

10.如权利要求1所述的小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法,其特征在于:所述方法包括以下内容:(1)供试品溶液的制备:

取小叶榕干浸膏提取物,加入10%乙腈,超声提取,摇匀,微孔滤膜过滤,取续滤液作为供试品溶液;

(2)对照品溶液制备:

分别精密称取没食子酸、原儿茶酸、5-二咖啡酰奎宁酸、儿茶素、咖啡酸、绿原酸、表儿茶酸、荭草素、牡荆素、异荭草素、芦丁对照品,置于1000ml量瓶中,用70%甲醇定容,配成混标溶液,备用;

(3)色谱条件:

色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填料;

检测波长:280nm;

流动相:流动相A为0.1%甲酸溶液,流动相B为甲醇,采用梯度洗脱,流动相比例均为体积百分比体积,洗脱程序如下:

0-6min,流动相A为95%→90%,流动相B为5%→10%;

6-10min,流动相A为90%→86%,流动相B为10%→14%;

10-18min,流动相A为86%→70%,流动相B为14%→30%;

18-25min,流动相A为70%→50%,流动相B为30%→50%;

25-29min,流动相A为50%→0%,流动相B为50%→100%;

29-32min,流动相A为0%,流动相B为100%;

(4)质谱条件:

采用UPLC-QQQMS,接有电喷雾离子源,负离子化模式;

喷雾电压45psi;

干燥气体氮气;干燥气流量11L/min;干燥气体温度350℃;

毛细管电压:负离子3.5kV;

扫描范围:m/z50-1000;

(5)标准指纹图谱的建立:以上述方法作为建立小叶榕干浸膏的指纹图谱的测试手段,取10批小叶榕干浸膏,配置成供试品溶液,将这10批供试品溶液经过HPLC-MS测定,获得10批样品的MRM图,将其中异牡荆素峰设为参照峰,计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积,以此获得以18个共有峰峰形成的指纹图谱;所述18个共有峰的峰面积之和占所有峰面积之和大于90%;

(6)以(1)-(4)所述方法作为待测小叶榕干浸膏的指纹图谱的测试手段,制备待测样品的指纹图谱;

(7)将待测小叶榕干浸膏的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比,相似度大于0.9。