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专利号: 2016112311689
申请人: 河南科技学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种去氢甲睾酮检测试纸卡,包括塑料盒体,所述塑料盒体一端设置有加样孔,设置在所述塑料盒体中的试纸条,所述试纸条包括支撑层,设置在所述支撑层上的样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫,所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线,其特征在于,所述检测线处设置有去氢甲睾酮包被抗原,所述质控线处设置有羊抗鼠IgG,所述结合垫上灌注有胶体金标记的抗去氢甲睾酮特异性单克隆抗体;

去氢甲睾酮包被抗原,为去氢甲睾酮-鸡卵清白蛋白偶联物,具有式I所示结构:式I中,OVA为鸡卵清白蛋白;

所述包被抗原的制备方法包括以下步骤:

1)将去氢甲睾酮溶于无水吡啶,得到去氢甲睾酮溶液;

2)将所述去氢甲睾酮溶液与琥珀酸酐混合,在45~60℃避光进行酯化反应30~40h,得到去氢甲睾酮衍生物;所述去氢甲睾酮和琥珀酸酐的质量比为1∶(0.6~1.5);

3)将所述去氢甲睾酮衍生物溶解后进行酸化,得到去氢甲睾酮-琥珀酸酯;所述溶解去氢甲睾酮衍生物用溶剂为质量分数为4~8%的碳酸氢钠溶液;所述酸化后还包括:将酸化产物进行重结晶,所述重结晶用溶剂包括乙醚或四氯化碳;

4)将所述去氢甲睾酮-琥珀酸酯与N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶于N,N-二甲基甲酰胺中,在35~40℃避光振荡条件下活泼酯法反应20~

30h,得到去氢甲睾酮-琥珀酸酯活化中间产物反应液;所述去氢甲睾酮-琥珀酸酯、N-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐的质量比为2∶(0.8~1.5)∶(2.5~3.5);

5)将所述去氢甲睾酮-琥珀酸酯活化中间产物反应液逐滴加入鸡卵清白蛋白磷酸盐缓冲溶液中,偶联反应3~6h,得到去氢甲睾酮-鸡卵清白蛋白偶联物;

所述包被抗原的浓度为0.2~0.3μg/ml;

所述抗去氢甲睾酮特异性单克隆抗体的浓度为0.1~0.2mg/ml。