1.大叶金花草指纹图谱的构建方法,其特征在于,采用液相色谱法对大叶金花草进行测定,具体方法如下:(1)材料准备:供试品的大叶金花草全采自广西,经广西中医药大学药用植物园鉴定为陵齿蕨科植物乌蕨Stenoloma chusanaum Ching的全草;原儿茶酸、原儿茶醛、荭草苷和牡荆素四种对照品由中国食品药品检定研究院提供;将供试品磨成粉末,过2号筛备用;
(2)参照物溶液的制备:
原儿茶醛,精密称定,用50%乙醇溶解,制成浓度为0.0498mg/ml的参照溶液;
原儿茶酸,五氧化二磷减压干燥24h,精密称定,用50%乙醇溶解,制成浓度为0.0538mg/ml的参照溶液;
牡荆素,五氧化二磷减压干燥24h,精密称定,用50%乙醇溶解,制成浓度为0.0573mg/ml的参照溶液;
荭草苷,五氧化二磷减压干燥24h,精密称定,用50%乙醇溶解,制成浓度为0.0503mg/ml的参照溶液;
(3)供试品溶液的制备:
称取供试品粉末0.3g,置于50ml锥形瓶中,加入50%乙醇30ml超声30min,滤过,浓缩至约15ml,用60ml乙酸乙酯萃取3次,每次20ml,挥干乙酸乙酯,得残留物,残留物用10%乙腈定容至5ml容量瓶中,用移液管从容量瓶中移取1ml~5ml容量瓶,再用10%乙腈稀释至刻度线即得供试品溶液;
(4)色谱条件及系统适用性试验:
色谱柱:Agilent TC-C18;
流动相:B泵:乙腈;D泵:0.4%磷酸;
梯度洗脱程序:
0~10min,B泵:10%→15%,D泵:90%→85%;
10~40min,B泵:15%→20%,D泵:85%→80%;
40~45min,B泵:20%→25%,D泵:80%→75%;
45~55min,B泵:25%→30%,D泵:75%→70%;
55~70min,B泵:30%→30%,D泵:70%→70%;
检测波长:210nm;
流速:1.0mL/min;
柱温:25℃;
理论塔板数按原儿茶酸计算不低于10000;
(5)测定:将供试品溶液放于离心机中13000r/min离心10分钟,精密吸取上清液10µL,注入液相色谱仪,照高效液相色谱法测定,得到指纹图谱。
2.根据权利要求1所述大叶金花草指纹图谱的构建方法,其特征在于,所述液相色谱仪为Agilent 1260 Infinity Series高效液相色谱仪,选择耐受压力为0-6200psi或0-
42MPa。
3.根据权利要求1所述大叶金花草指纹图谱的构建方法,其特征在于,所述指纹图谱中有 14个特征共有峰,利用DAD检测器,对供试品与参照物同时检测,其中2号峰为原儿茶酸,
3号峰为原儿茶醛,6号峰为荭草苷,8号峰为牡荆素。