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专利号: 2017100152667
申请人: 宁波大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-08-24
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种快速测定磺胺类抗生素残留的仿生酶联免疫检测方法,其特征在于包括以下步骤:

(1)分子印迹-量子点纳米结构人工抗体的制备

将7.5mL环己烷和1.8mL Triton X-100加入两口烧瓶中,于150rpm磁力搅拌15min,然后依次加入400μL浓度为2.5nmol/mL的量子点溶液、50μL正硅酸乙酯和100μL氨水,磁力搅拌2h;然后加入200μL浓度为1.0-5.0mg/mL的模板分子溶液以及20-25μL的功能单体,室温下聚合反应12h后;再加入10mL丙酮,涡旋1min,然后于9000rpm离心10min,弃掉上清液后,再加入6mL双蒸水,充分分散后,于9000rpm离心10min,最后用10.0mL由体积比为8:2的乙醇和乙腈组成的混合液洗脱2h以除去磺胺类抗生素,再分散于1.0mL乙醇磷酸盐溶液中,得到分子印迹-量子点纳米结构人工抗体溶液,其中乙醇磷酸盐溶液中乙醇质量分数为50-

80%;所述的量子点是CdS/ZnS,所述的分子印迹-量子点纳米结构人工抗体的粒径为

150nm;所述的模板分子为磺胺嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺-5-甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲噁唑或者磺胺二甲氧嘧啶;所述的功能单体为氨丙基三乙氧基硅烷或者甲基丙烯酸;

(2)待测样品检测

A.用乙醇将酶标孔润洗3次,然后在每个酶标孔中依次加入50μL分子印迹-量子点纳米结构人工抗体溶液和150μL样品提取液;并设置空白对照酶标孔组,空白对照酶标孔组每孔加入150μLpH为8-10的磷酸盐缓冲液;

B.将酶标板室温育10min,然后用酶标仪读出发射波长在605nm下的数值,根据荧光值由标准曲线计算出样品提取液中磺胺类抗生素含量。

2.根据权利要求1所述的一种快速测定磺胺类抗生素残留的仿生酶联免疫检测方法,其特征在于:步骤(2)中所述的标准曲线以标准溶液浓度为横坐标,(F0/F-1)为纵坐标,其中F0为空白对照孔的平均荧光值,F为磺胺标准液的平均荧光值。

3.根据权利要求1所述的一种快速测定磺胺类抗生素残留的仿生酶联免疫检测方法,其特征在于步骤(2)中所述的样品提取液制备方法如下:准确称取待测样品2.0g,于

18000rpm匀浆,然后加入2.0mL乙腈,涡旋震荡10min,超声15min,5000rpm离心5min;然后取上清液至离心管中,加入3mL乙腈饱和正己烷;手动震荡15~20s,于5000rpm离心5min,取下层液体用0.22μm滤膜过滤得到样品提取液。