欢迎来到知嘟嘟! 联系电话:13095918853 卖家免费入驻,海量在线求购! 卖家免费入驻,海量在线求购!
知嘟嘟
我要发布
联系电话:13095918853
知嘟嘟经纪人
收藏
专利号: 2017100514422
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-08-24
缴费截止日期: 暂无
价格&联系人
年费信息
委托购买

摘要:

权利要求书:

1.一种姜黄素衍生物的制备方法,其特征在于所述方法为:以少孢根霉须状变种(Rhizopus microsporus var.rhizopodiformis)ZJPH1308发酵培养获得的湿菌体为催化剂,以姜黄素为底物,以pH值5.4~8.0磷酸缓冲液为反应介质构成转化体系,在25~50℃、

150~250rpm条件下进行转化反应,转化结束后将转化液分离纯化,获得4,4’-(3-Hydroxyheptane-1,7-diyl)-bis-2-methoxyphenol和六氢姜黄素。

2.如权利要求1所述姜黄素衍生物的制备方法,其特征在于所述湿菌体的用量以菌体干重计为2~25g/L转化体系,所述姜黄素底物的初始浓度为20~300mg/L转化体系。

3.如权利要求1所述姜黄素衍生物的制备方法,其特征在于所述转化反应液分离纯化方法为:转化结束后,将转化液离心,取上清液用乙酸乙酯萃取,将萃取液减压蒸馏除去乙酸乙酯,取浓缩液进样半制备液相进行分离,分别收集保留时间为25.9min和38.5min的流出液,蒸除溶剂,再进行薄层层析分离,分别收集Rf值为0.275和0.475的显色条带,无水甲醇浸洗三次,蒸除溶剂,分别获得六氢姜黄素和4,4’-(3-Hydroxyheptane-1,7-diyl)-bis-

2-methoxyphenol。

4.如权利要求1所述姜黄素衍生物的制备方法,其特征在于所述半制备液相分离条件为:仪器型号为岛津LC-60AD,色谱柱为Luna C18(2), 5μm;检测波长:280nm,流速:3mL/min,进样量:500μL,流动相:乙腈-水溶液梯度洗脱,所述乙腈与水梯度洗脱体积比分别为:0-10min为20:80、10-20min为35:65、20-42min为40:60、42-50min从40:60改变为

100:0、50-65min从100:0改变为20:80。

5.如权利要求1所述姜黄素衍生物的制备方法,其特征在于所述薄层层析分离以体积比为25:25:1的二氯甲烷、正己烷和无水甲醇溶液为展开剂。

6.如权利要求1所述姜黄素衍生物的制备方法,其特征在于所述湿菌体按如下方法制备:

(1)斜面培养:将少孢根霉须状变种ZJPH1308接种至斜面培养基,30℃培养4~5天,获得斜面菌体;所述斜面培养基的终浓度为:土豆200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂20g/L,溶剂为水,pH自然;

(2)种子培养:从斜面菌体挑选一环菌体接种至种子培养基中,30℃、200rpm培养22h,获得种子液;所述种子培养基终浓度组成为:葡萄糖20~30g/L、蛋白胨25~35g/L、(NH4)

2SO41~3g/L、KH2PO4 0.5~1.5g/L、MgSO4·7H2O 0.5~1.5g/L,pH 5~8,溶剂为水;

(3)发酵培养:以体积浓度2~10%接种量将种子液接种到发酵培养基中,30℃、200rpm发酵培养24h,将菌体取出,蒸馏水洗涤三次,收集湿菌体;所述发酵培养基终浓度组成:碳源10~40g/L、氮源10~40g/L、KH2PO4 0.5~1.5g/L、MgSO4·7H2O 0.5~1.5g/L,pH 5~8,溶剂为水;所述碳源为下列之一:麦芽糖、葡萄糖、甘油、可溶性淀粉、蔗糖、糊精或乳糖;所述氮源为下列之一:酵母膏、蛋白胨、牛肉膏、黄豆粉、玉米浆、氯化铵或硫酸铵。

7.如权利要求1所述姜黄素衍生物的制备方法,其特征在于所述发酵培养基终浓度组成为:糊精20g/L、蛋白胨30g/L、KH2PO4 1g/L、MgSO4·7H2O 1.3g/L,pH 6.0,溶剂为水。

8.如权利要求1所述姜黄素衍生物的制备方法,其特征在于所述4,4’-(3-

Hydroxyheptane-1,7-diyl)-bis-2-methoxyphenol按如下步骤进行制备:将少孢根霉须状变种ZJPH1308发酵培养获得的湿菌体和姜黄素加入pH值为5.4~8.0磷酸缓冲液中构成转化体系,在30℃、200rpm条件下进行转化反应48h,转化结束后,将转化液离心,取上清液用乙酸乙酯萃取三次,合并萃取液,减压浓缩至干除去乙酸乙酯,取浓缩物用色谱甲醇溶解,将溶解样品进样半制备液相进行分离,收集保留时间为38.5min的流出液,蒸除溶剂,将样品重溶于甲醇,进行薄层层析分离,以体积比为25:25:1的二氯甲烷、正己烷和无水甲醇溶液为展开剂,经多次展开后,在254nm紫外灯下观察色谱带并标记,将标记的色谱带连同硅胶粉用刮刀从薄层板上刮下,收集Rf值为0.475的显色条带,用无水甲醇浸洗三次,蒸除溶剂,获得所述姜黄素衍生物即为4,4’-(3-Hydroxyheptane-1,7-diyl)-bis-2-methoxyphenol;所述湿菌体的用量以菌体干重计为9.8g/L转化体系,所述姜黄素底物的初始浓度为50mg/L转化体系。

9.如权利要求1所述姜黄素衍生物的制备方法,其特征在于所述六氢姜黄素按如下步骤进行制备:将少孢根霉须状变种ZJPH1308发酵培养获得的湿菌体和姜黄素加入pH值为

5.4~8.0磷酸缓冲液中构成转化体系,在30℃、200rpm条件下进行转化反应48h,转化结束后,将转化液离心,取上清液用乙酸乙酯萃取三次,合并萃取液,减压浓缩至干除去乙酸乙酯,取浓缩物用色谱甲醇溶解,将溶解样品进样半制备液相进行分离,收集保留时间为

25.9min的流出液,蒸除溶剂,将样品重溶于甲醇,进行薄层层析分离,以体积比为25:25:1的二氯甲烷、正己烷和无水甲醇溶液为展开剂,经多次展开后,在254nm紫外灯下观察色谱带并标记,将标记的色谱带连同硅胶粉用刮刀从薄层板上刮下,收集Rf值为0.275的显色条带,用无水甲醇浸洗三次,蒸除溶剂,获得六氢姜黄素;所述湿菌体的用量以菌体干重计为

9.8g/L转化体系,所述姜黄素底物的初始浓度为50mg/L转化体系。