1.一种浙江楠体细胞胚诱导方法,其包括如下步骤:
1)以浙江楠未成熟果实为外植体,进行表面灭菌;
2)剥取种子幼胚,接种于所述的体细胞胚诱导培养基上,进行体细胞胚诱导,所述的体细胞胚诱导培养基为含有下述成分的MS固体培养基:谷氨酰胺400-600mg/L、水解酪蛋白
400-600mg/L、2,4-D 0.4-0.6mg/L、6-BA0.8-1.2mg/L;
3)将步骤2)诱导体细胞胚接种于所述的体细胞胚增殖培养基上,进行体细胞胚的增殖,产生次生胚,所述的体细胞胚增殖培养基为含有下述成分的MS固体培养基:6-BA 0.1-
1.0 mg/L、NAA 0.1-1.0mg/L。
2.如权利要求1所述的浙江楠体细胞胚诱导方法,其特征在于,还包括:将步骤3)得到的次生胚接种于所述的体细胞胚萌发培养基进行体细胞胚的萌发,所述的体细胞胚萌发培养基为含有下述成分的MS固体培养基:6-BA 1.0 mg/L、IBA 0.1mg/L或者NAA0.1 mg/L。
3.如权利要求1所述的浙江楠体细胞胚诱导方法,其特征在于,所述的体细胞胚诱导培养基为含有下述成分的MS固体培养基:谷氨酰胺500mg/L、水解酪蛋白500mg/L、2,4-D
0.5mg/L、6-BA1.0mg/L,所述的体细胞胚增殖培养基为含有下述成分的MS固体培养基:NAA
0.1-1.0mg/L。
4.如权利要求2所述的浙江楠体细胞胚诱导方法,其特征在于,所述的体细胞胚萌发培养基为含有下述成分的MS固体培养基:6-BA 1.0 mg/L、IBA 0.1mg/L。
5.如权利要求1所述的浙江楠体细胞胚诱导方法,其特征在于,在步骤2)体细胞胚诱导过程中或者在步骤3)体细胞胚增殖过程中,体细胞胚表面产生黄色颗粒状的胚性愈伤组织,将所述胚性愈伤组织接种于所述体细胞胚增殖培养基上,每隔半个月继代一次,进行愈伤组织的增殖和体细胞胚的诱导。
6.如权利要求1所述的浙江楠体细胞胚诱导方法,其特征在于,步骤1)表面灭菌方法为:将未成熟果实洗净,在流水中冲洗1-3h,然后用75%酒精处理20-40s,无菌水冲洗3 4次~后,用0.1%升汞灭菌8-15 min,再用无菌水冲洗5 7次,洗去残余升汞。
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7.如权利要求1-6任一项所述的浙江楠体细胞胚诱导方法,其特征在于,幼胚接种到体细胞胚诱导培养基前,将幼胚置于 0.4-0.6M蔗糖中,4℃预处理48-96h。
8.如权利要求1-6任一项所述的浙江楠体细胞胚诱导方法,其特征在于,所述种子幼胚胚龄为球形胚至心形胚之间。