1.一种制备神经干细胞的方法,包括如下步骤:
将外源mir‑302的cDNA序列克隆到慢病毒载体上,得到重组载体,再将重组载体进行测序,测序无误的克隆进行质粒抽提,然后将重组载体转入293T细胞进行病毒包装,并利用超滤或超速离心进行病毒浓缩,感染293T细胞,利用倍比稀释法进行病毒滴度测试;每20000个人成体包皮成纤维细胞,加入病毒液4微升,同时加入6微升polybrene,使polybrene终浓度为6μg/ml,同时添加VPA 10微升,使VPA的终浓度为0.5mMol/L,感染72小时,中间第24小时后加入VC 50ng/ml,中间第48小时后,补加神经干细胞诱导液500微升,所述诱导液中添加有20 ng/ml bFGF和10 ng/ml EGF,感染结束后撤去含有病毒的培养液,转入低粘附板培养,每两天换液,2‑3周内获得神经干细胞。
2.一种制备神经干细胞的方法,包括如下步骤:
将外源mir‑302的cDNA序列克隆到慢病毒载体上,得到重组载体,再将重组载体进行测序,测序无误的克隆进行质粒抽提,然后将重组载体转入293T细胞进行病毒包装,并利用超滤或超速离心进行病毒浓缩,感染293T细胞,利用倍比稀释法进行病毒滴度测试;每10000个鼠胚胎成纤维细胞,加入病毒液4微升,同时加入6微升polybrene,使polybrene的终浓度为6μg/ml,同时添加VPA 10微升,使VPA的终浓度为0.5mMol/L,感染72小时,中间第24小时后加入VC 50 ng/ml,中间第48小时后,补加神经干细胞诱导液500微升,所述诱导液中添加有20 ng/ml bFGF和10 ng/ml EGF,感染结束后撤去含有病毒的培养液,转入低粘附板培养,每两天换液,2‑3周内获得神经干细胞。
3.一种神经干细胞,其特征在于所述的神经干细胞是由权利要求1或2所述的方法制备的。
4.权利要求3所述神经干细胞的用途,其特征在于用于制备预防或治疗神经系统疾病的药物组合物。