1.紫色红曲霉(Monascus purpureus)M-piy菌株，该保藏于武汉大学菌种保藏中心，保藏地址为：中国武汉武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M 2016627，保藏日期：2016年11月9日；

该菌株基因组上存在的色素合成相关基因PigE被敲除，由潮霉素基因hph基因序列所替代。

2.权利要求1所述的紫色红曲霉M-piy菌株的制备方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：

1)PigE基因上下游臂和hph基因的扩增：

利用GeneBank中公布的红色红曲霉(Monascus ruber)中PigE基因序列，设计两对引物P1、P2和P3、P4分别扩增靶基因PigE基因的翻译起始区和终止密码子区侧翼序列，引物序列如下所述：P1和P2用于扩增PigE基因上游臂，P3和P4用于扩增PigE基因下游臂，加下划线部分序列为hph基因部分序列；hph-F和hph-R用于从pCB1003载体中扩增hph基因；P1和P4用于进行三段连接反应，双下划线部分分别为Kpn Ⅰ和Xba Ⅰ酶切位点；

PigE基因5’侧翼序列和3’侧翼序列PCR扩增体系如下：PigE基因5’侧翼序列PCR反应条件如下：98℃预变性4min，98℃变性30s，64℃退火30s，

72℃延伸1min，循环数为30个，72℃终延伸10min，12℃保存；PigE基因3’侧翼序列PCR反应条件如下：98℃预变性4min，98℃变性30s，68℃退火30s，72℃延伸1min，循环数为30个，72℃终延伸10min，12℃保存；

2)Double-joint PCR法连接PigE基因上下游臂、hph基因：PigE基因的5’侧翼序列、3’侧翼序列、hph基因序列加入PCR管中，进行两轮PCR反应；第一轮PCR反应体系如下：反应成分 体积(μL)

dNTP 2

purified PigE 5,-flanking amplicon 1purified PigE 3,-flanking amplicon 1purified hph amplicon 3

5×prime STAR buffer 5

Prime STAR HS DNA Polymersae 0.25ddH2O Up to 25

第一轮PCR反应条件如下：98℃预变性4min，98℃变性30s，55℃退火10min，72℃延伸

4min，循环数为15个，72℃终延伸10min，12℃保存；

第二轮PCR反应体系如下：

反应成分 体积(μL)

dNTP 4

LA PCR buffer 2

LF 1

LR 1

Template 0.5

LA Taq DNA Polymersae 0.2

ddH2O Up to 25

第二轮PCR反应条件如下:98℃预变性3min，98℃变性30s，68℃退火30s，72℃延伸

3min，循环数为30个，72℃终延伸10min，12℃保存；

PigE基因敲除盒和pKO1B质粒用XbaⅠ和KpnⅠ双酶切，酶切后敲除盒用DNA清洁试剂盒纯化，pKO1B质粒酶切后跑电泳割胶回收，后用T4 DNA Ligase连接，连接产物转化根癌农杆菌AGL-1菌株，菌液PCR验证，验证敲除载体；

3)红曲霉分生孢子悬浮液的制备

将野生型红曲霉菌株接种于PDA培养基，30℃培养21d，后用5mL无菌水清洗培养平板，洗脱液经4层擦镜纸过滤，滤液即为红曲霉孢子悬浮液；将红曲霉孢子悬浮液离心后用无菌水重悬，血球计数板计数，配成浓度为105孢子/mL的红曲霉分生孢子悬浮液；

4)根癌农杆菌的活化与诱导培养

将含有敲除载体的农杆菌AGL-1菌株在含有50μg/mL卡那霉素(Kan)、50μg/mL利福平(Rif)抗性的LB培养平板上划线培养2d；后挑取农杆菌单菌落接种于2mL含有50μg/mL卡那霉素抗性的LB液体培养基中，28℃、180r/min摇床培养12-16h；培养后的农杆菌菌液离心弃上清，菌体沉淀用诱导培养基IM稀释，诱导培养基IM加入1mL 100mg/L MES，1mL0.01％FeSO4，400μL 0.1mol/L AS，后28℃180r/min培养5-6h，至农杆菌菌液OD600＝0.5；

5)农杆菌与红曲霉孢子洗脱液共培养

将制备的红曲霉孢子悬浮液5000r/min离心10min，红曲霉孢子用经诱导活化培养获得的农杆菌菌液稀释，血球计数板计数稀释至红曲霉孢子悬浮液浓度为1×105个/mL；取上述红曲霉孢子与农杆菌混合液200μL涂布于硝酸纤维素膜上，后将硝酸纤维素膜贴于Co-IM培养基表面，Co-IM培养基加入1mL 100mg/L MES，1mL 0.01％FeSO4，800μL 0.1mol/L AS，28℃培养3d；

6)筛选获得紫色红曲霉M-piy菌株。

3.权利要求1所述的紫色红曲霉M-piy菌株用于生产红曲黄色素。

4.一种红曲黄色素的生产方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：

1)将保藏的紫色红曲霉M-piy菌株接种到PDA培养基上，28℃活化培养7d；

2)用打孔器取3个边缘菌饼转接到装有100mL PD培养液的250mL三角瓶中，28℃、180r/min摇床上培养3d用作种子液；

3)再将种子液按10％质量百分比转接到YES液体培养基中、28℃、180r/min摇床上分别培养11～19d。

5.根据权利要求4所述的一种红曲黄色素的生产方法，其特征在于，PDA培养基按质量百分比计包括以下组分：马铃薯20％、葡萄糖2％、琼脂粉2.0％、pH 5.0～5.5。

6.根据权利要求4所述的一种红曲黄色素的生产方法，其特征在于，PD液体培养基按质量百分比计包括以下组分：马铃薯20％、葡萄糖2％、pH 5.0～5.5。

7.根据权利要求4所述的一种红曲黄色素的生产方法，其特征在于，YES液体培养基按质量百分比计包括以下组分：酵母提取物4％、蔗糖16％、pH 5.5～6.0。