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专利号: 2017100995371
申请人: 河南科技学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于直接竞争酶联免疫法铬离子检测试剂盒,包括:(1)包被有羊抗鼠IgG二抗的检测板,所述检测板真空密封包装;所述羊抗鼠IgG二抗的包被浓度为80~150μg/mL;

(2)质量浓度为30~40μg/mL的酶标Cr-ITCBE鳌合物半抗原溶液;

(3)质量浓度为13~18μg/mL的抗铬离子单克隆抗体溶液;所述抗铬离子单克隆抗体溶液由Cr-ITCBE-BSA免疫原免疫Balb/C小鼠制备而来;

(4)1.0~3.0mol/L的终止液;

(5)样品稀释液;

(6)底物显色液;

(7)洗涤液;

(8)铬离子标准品溶液;

(9)质量浓度为10~20mg/mL的EDTA处理液;

所述样品稀释液为质量浓度为2~10g/L的HEPES缓冲液;

所述洗涤液为包含质量浓度0.05~0.1%Tween20的PBS溶液;

所述Cr-ITCBE-cBSA免疫原的制备方法包括以下步骤:(1)将ITCBE和二甲基亚砜(DMSO)按照ITCBE的质量和二甲基亚砜的体积比为(8~12)mg:1mL混合,形成金属鳌合剂溶液;

(2)将氯化铬与HEPES缓冲液按照16.1mg:1mL的比例混合,形成Cr3+溶液;

(3)将所述步骤(1)中得到的金属鳌合剂溶液和所述步骤(2)中得到的Cr3+溶液按照体积比为1:1混合,调节混合液pH值至7.0,然后在23~27℃条件下振荡反应10~14h,形成Cr-ITCBE鳌合物半抗原;

(4)将BSA、EDC与PBS缓冲液混合搅拌得到混合液,BSA质量、EDC质量与PBS缓冲液的体积比为66mg:11.6mg:5mL,将所述混合液与乙二胺按照混合液体积和乙二胺质量比为5mL:

7mg的比例混合,37℃振荡反应2h得反应液;反应液用PBS透析4d,得到活化的载体蛋白BSA;

(5)将所述活化的载体蛋白BSA和pH值为8.0的HEPES缓冲液混合,形成浓度为30mg/mL的载体蛋白溶液;

(6)将所述步骤(3)中得到的Cr-ITCBE鳌合物半抗原溶液和所述步骤(5)得到的载体蛋白溶液按照体积比为1:1的比例混合,调节pH值至9.0,23~27℃条件下振荡反应22~26h,将得到的反应液装入透析袋,先用蒸馏水透析2d,再用PBS透析3d,即形成Cr-ITCBE-cBSA免疫原;

所述酶标Cr-ITCBE鳌合物半抗原的制备方法,包括以下步骤:A.将异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)与二甲基亚砜(DMSO)混合形成金属鳌合剂溶液;

B.将氯化铬与HEPES缓冲液混合,形成Cr3+溶液;

C.将所述步骤A中得到的金属鳌合剂溶液和所述步骤B中得到的Cr3+溶液混合,调节混合液的pH值至7.0~7.2,得到的混合液振荡反应10~14h,形成Cr-ITCBE鳌合物半抗原;

D.将标记用酶与HEPES缓冲液混合,得到酶溶液;

E.将所述步骤C得到的Cr-ITCBE鳌合物半抗原溶液与所述步骤D中得到的酶溶液混合,调节混合物的pH值至8.8~9.2,再将混合液振荡反应22~26h,得到酶标Cr-ITCBE螯合物半抗原;

所述步骤A、B和D之间没有时间顺序的限制;

所述C和D之间没有时间顺序的限制。

2.权利要求1所述铬离子检测试剂盒在检测环境中铬离子的应用,其特征在于,包括以下步骤:a、将抗铬离子单克隆抗体溶液、稀释的待测样品溶液和酶标Cr-ITCBE鳌合物半抗原溶液加入到包被有羊抗鼠IgG二抗的检测板孔内,混合,孵育后用洗涤液洗涤;

b、向检测板中加入底物显色液,孵育,加入终止液混合,测定OD值;

c、根据所述步骤b得到的OD值与预定的标准曲线,得到待测样品中铬离子的浓度,所述标准曲线是铬离子浓度与OD值之间的线性关系曲线。

3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述检测板孔内抗铬离子单克隆抗体溶液、稀释的待测样品溶液和酶标Cr-ITCBE鳌合物半抗原溶液的体积比为1~2:1~2:1~2。

4.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述步骤a和b中孵育的温度独立地为30~

40℃。

5.根据权利要求2或4所述的应用,其特征在于,所述步骤a和b中孵育的时间独立地为5~30min。