欢迎来到知嘟嘟! 联系电话:13095918853 卖家免费入驻,海量在线求购! 卖家免费入驻,海量在线求购!
知嘟嘟
我要发布
联系电话:13095918853
知嘟嘟经纪人
收藏
专利号: 2017101198047
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-08-24
缴费截止日期: 暂无
价格&联系人
年费信息
委托购买

摘要:

权利要求书:

1.一种山豆根中黄酮类化合物的提取检测方法,待检测的黄酮类化合物为

lupinifolin和山豆根色满二氢黄酮C,分别简称为黄酮1和黄酮4,其特征在于,所述的方法包括如下步骤:(a)制备黄酮类化合物提取液

将山豆根药材粉末和吸附剂混合并研磨均匀,得到固体混合物;将所得固体混合物装填入固相萃取柱中,并用洗脱剂进行洗脱,收集洗脱液,离心取上层清液,得到黄酮类化合物提取液;

所述山豆根药材粉末和吸附剂的质量比为1:0.5~3;

所述的吸附剂为:C18、Al2O3、硅胶、硅藻土、弗罗里硅土、ZSM-5、TS-1、SAPO-11、MCM-48或SBA-15;

所述研磨的时间为90~210s;

所述的洗脱剂为:甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、甲醇/乙腈体积比1:1的混合溶剂或甲醇/乙醇体积比1:1的混合溶剂;

所述洗脱剂的体积用量为固相萃取柱体积的0.15~0.8倍;

(b)检测样品溶液

取步骤(a)中制备的黄酮类化合物提取液,挥干后先用甲醇溶解配制成50~100mg/mL浓度的溶液,再用0.25mM硼砂缓冲液稀释1~5倍,然后经0.22μm微孔滤膜过滤,取滤液即为待测样品溶液;采用反向微乳毛细管电动色谱法对所得待测样品溶液进行检测,获得待测样品溶液的电泳谱图;

所述微乳毛细管电动色谱法的分离条件为:色谱柱为56cm×50μm未涂层石英毛细管,运行电压-15~-30v;检测温度20~35℃;常规电压进样条件:-20kv,5s;检测波长280nm;微乳液组成:表面活性剂0.8%~3.0%、辅助表面活性剂2.2%~10%、油相0.3%~0.9%、有机改性剂10%~20%、手性拆分剂0~20mM、余量为缓冲液pH=1~3的10~30mM NaH2PO4水溶液;

所述微乳液的组成中,所述的表面活性剂为十二烷基硫酸钠,所述的辅助表面活性剂为正丁醇,所述的油相为乙酸乙酯,所述的有机改性剂为乙腈,所述的手性拆分剂为羟丙基-β-环糊精、β-环糊精、甲基-β-环糊精或磺丁基-β-环糊精钠;

所述反向微乳毛细管电动色谱法的富集条件为:样品基质pH=7.5~9.5的0.1~

10mmol/L硼砂缓冲液,水塞组成体积分数10%乙腈水溶液,进水时间5~40s,进样时间20~

40s,进样电压-10~-25kv,运行电压-20kv,检测温度25℃;

(c)绘制标准曲线

精密称取黄酮1和黄酮4标准品,配制一系列不同浓度的混合标准品溶液,采用反向微乳毛细管电动色谱法并按照步骤(b)中的分离条件和富集条件分别对各混合标准品溶液进行检测,得到混合标准品溶液的电泳谱图,分别以谱图中黄酮1和黄酮4的峰面积为纵坐标,以混合标准品溶液中黄酮1和黄酮4的质量浓度为横坐标作图,获得黄酮1和黄酮4的标准曲线和标准曲线方程;

所述混合标准品溶液的配制方法为:精密称取质量比为1:1~3的黄酮1和黄酮4标准品,先用甲醇溶解制备黄酮1浓度在0.5~1200μg/mL范围内的溶液,再用0.25mM硼砂缓冲液稀释1.2~1200倍;

(d)获取样品检测结果

将步骤(b)所得待测样品溶液的电泳谱图中黄酮1和黄酮4的峰面积值代入步骤(c)所得标准曲线方程中,计算得出待测样品溶液中黄酮1和黄酮4的质量浓度,进而换算得到山豆根中黄酮1和黄酮4的含量。

2.如权利要求1所述的山豆根中黄酮类化合物的提取检测方法,其特征在于,步骤(a)中,所述山豆根药材粉末和吸附剂的质量比为1:1~3。

3.如权利要求1所述的山豆根中黄酮类化合物的提取检测方法,其特征在于,步骤(a)中,所述的吸附剂为:SBA-15。

4.如权利要求1所述的山豆根中黄酮类化合物的提取检测方法,其特征在于,步骤(a)中,所述研磨的时间为120~180s。

5.如权利要求1所述的山豆根中黄酮类化合物的提取检测方法,其特征在于,步骤(a)中,所述的洗脱剂为:甲醇。

6.如权利要求1所述的山豆根中黄酮类化合物的提取检测方法,其特征在于,步骤(a)中,所述洗脱剂的体积用量为固相萃取柱体积的0.35~0.65倍。

7.如权利要求1所述的山豆根中黄酮类化合物的提取检测方法,其特征在于,步骤(b)中,所述微乳液的组成中,所述的手性拆分剂为磺丁基-β-环糊精钠。

8.如权利要求1所述的山豆根中黄酮类化合物的提取检测方法,其特征在于,步骤(b)中,所述微乳液的组成为:十二烷基硫酸钠1%、正丁醇6.6%、乙酸乙酯0.5%、乙腈15%、磺丁基-β-环糊精钠10mM、余量为缓冲液pH=2的20mM NaH2PO4水溶液。

9.如权利要求1所述的山豆根中黄酮类化合物的提取检测方法,其特征在于,步骤(b)中,所述微乳液的制备方法为:将组成微乳液的各成分混合置于具塞容量瓶中,在600w的条件下超声30min即形成微乳液,使用前经0.22μm微孔滤膜过滤。

10.如权利要求1所述的山豆根中黄酮类化合物的提取检测方法,其特征在于,步骤(b)中,所述的富集条件为:样品基质pH=8.5的0.25mmol/L硼砂缓冲液,水塞组成体积分数

10%乙腈水溶液,进水时间20s,进样时间30s,进样电压-20kv,运行电压-20kv,检测温度25℃。