1.一种鉴定乌苏里拟鲿雌、雄个体的微卫星标记,其特征在于:该微卫星标记的核苷酸序列为SEQ ID NO:1-2中的任一个。
2.一种特异性扩增如SEQ ID NO:1-2中任一所示微卫星标记序列的引物对。
3.根据权利要求2所述的引物对,其特征在于:所述引物对上下游引物的序列如SEQ ID NO:3-4所示。
4.一种用于乌苏里拟鲿雌、雄个体鉴定的试剂盒,其特征在于:该试剂盒包含权利要求
2或3所述的引物对。
5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于:所述的试剂盒还可以包括PCR技术常用的试剂。
6.权利要求1所述的微卫星标记、权利要求2或3所述的引物对、权利要求4或5所述的试剂盒在乌苏里拟鲿雌、雄个体鉴定中的应用。
7.一种鉴定乌苏里拟鲿雌、雄个体的方法,其特征在于:包括如下步骤: 1)基因组总DNA抽提:抽提目标个体的基因组DNA;
2)微卫星标记PCR 扩增:采用权利要求3所述的引物对,以步骤1)获得的目标个体基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得目标个体微卫星PCR扩增产物;
3)扩增产物电泳检测:采用聚丙烯酰胺凝胶电泳及GoldView染色法检测步骤2)获得的微卫星PCR扩增产物;
4)基因型分析:根据每个个体微卫星PCR扩增产物的分子量大小确定基因型,若某一个体在该微卫星标记表现为雌性等位基因型,则该个体为雌性;若某一个体在该位点表现为雄性等位基因型,则该个体为雄性。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于:步骤4)中,若某一个体只在130 bp处有扩增条带,则该个体为雌性;若某一个体在130 bp和118 bp处均有扩增条带,则该个体为雄性。
9.根据权利要求7所述的方法,其特征在于:所述PCR扩增的反应体系:以总体积13 µL为例,包含30-50 ng的模板DNA,0 .5 U Taq DNA聚合酶,1 .3 µL 10× PCR Buffer,0 .5 µL 2.5 mM dNTP,0.5 µL正反向混合引物,正反向混合引物各2.5 µM,9.6 µL灭菌超纯水;
所述PCR扩增的程序为:95°C预变性5分钟;以94°C变性40秒、54°C退火40秒、72°C延伸40秒为一个循环,共循环36个;最后72°C终延伸7分钟,PCR产物于4°C保存。
10.根据权利要求7所述的方法,其特征在于:步骤3)的详细过程为:将微卫星PCR扩增产物在10%的非变性聚丙烯酰胺凝胶,30 W 恒功率电泳2小时10分钟进行分离;将胶板通过
1 .5%的GoldView溶液显色5-8分钟,即可得到目标个体在该微卫星座位的基因分型。