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专利号: 2017102137572
申请人: 重庆理工大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种测定富含还原糖的蛋白样品中蛋白质含量的方法,其特征在于,具有以下步骤,

1)采用DNS法制备葡萄糖标准曲线,采用BCA法制备葡萄糖标准曲线,采用BCA法制备牛血清蛋白标准曲线;

2)将富含还原糖的蛋白样品研磨、离心,取上清液定容,得到富含还原糖的蛋白样品液;

3)在步骤2)所得蛋白样品液中取样,采用DNS法测定样品中还原糖的OD值,记为OD1,将OD1代入步骤1)DNS法制备葡萄糖标准曲线中,得到步骤2)所得蛋白样品液中还原糖的浓度,记为C1;

4)将步骤3)所得C1代入步骤1)BCA法制备葡萄糖标准曲线中,得到对应的OD值,记为OD2;

5)在步骤2)所得蛋白样品液中取样,采用BCA法测定样品中还原糖+蛋白质的OD值,记为OD3;

6)步骤5)所得OD3减去步骤4)所得OD2,得OD4,将OD4代入步骤1)BCA法制备牛血清蛋白标准曲线中,得到步骤2)所得蛋白样品液中蛋白质的浓度,记为C2,C2与步骤2)定容体积相乘得到富含还原糖的蛋白样品中蛋白质含量。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤2)中所述研磨是将富含还原糖的蛋白样品与pH=7的磷酸缓冲液在研钵中混合后研磨,所述离心的转速为12000r/min,取上清液。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤1)采用DNS法制备葡萄糖标准曲线的步骤为:

1.1分别配置浓度为0mg/ml、0.48mg/ml、0.56mg/ml、0.64mg/ml、0.72mg/ml的葡萄糖标准溶液;

1.2按5体积份葡萄糖标准溶液混合4体积份DNS反应试剂的比例添加DNS反应试剂混匀,混匀后,沸水浴5min,快速冷却,用蒸馏水定容;

1.3步骤1.2各定容后的葡萄糖标准溶液在UV波长540nm测定,得到对应吸光值;

1.4以各葡萄糖标准溶液浓度为横坐标,各葡萄糖标准溶液吸光值为纵坐标,制备得到葡萄糖标准曲线。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤1)采用BCA法制备葡萄糖标准曲线的步骤为:

2.1分别配置浓度为0mg/ml、0.4mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1mg/ml的葡萄糖标准溶液;

2.2按5体积份葡萄糖标准溶液混合4体积份BCA反应试剂的比例添加BCA反应试剂混匀,混匀后,沸水浴5min,快速冷却,用蒸馏水定容;

2.3步骤2.2各定容后的葡萄糖标准溶液在UV波长562nm测定,得到对应吸光值;

2.4以各葡萄糖标准溶液浓度为横坐标,各葡萄糖标准溶液吸光值为纵坐标,制备得到葡萄糖标准曲线。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤1)采用BCA法制备牛血清蛋白标准曲线的步骤为:

3.1分别配置浓度为0mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、

0.6mg/ml、1mg/ml的蛋白标准溶液;

3.2按5体积份牛血清标准溶液混合4体积份BCA反应试剂的比例添加BCA反应试剂混匀,混匀后,沸水浴5min,快速冷却,用蒸馏水定容;

3.3步骤3.2各定容后的蛋白标准溶液在UV波长562nm测定,得到对应吸光值;

3.4以各蛋白标准溶液浓度为横坐标,各蛋白标准溶液吸光值为纵坐标,制备得到蛋白标准曲线。