1.一种检测六种鸭易感病毒的多重PCR方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、基因组准备

按照Viral RNA/DNA Extraction Kit试剂盒说明书分别提取6种病毒已有毒株基因组RNA/DNA，无核酸酶超纯水溶解后分光光度计测定浓度与纯度；将DHAV-1、DTMUV、ARV及H9N2的RNA按照MMLV说明书反转录为cDNA，所有DNA/cDNA置于-80℃保存备用；

步骤2、引物设计与合成

分别比对DHAV-1、DPV、DTMUV、MPDV、ARV、H9N2这6种病毒在Genebank中已公布的蛋白序列与实验室已有毒株的病毒蛋白序列，选择保守区域利用Primer Premier V5.0和Oligo V6.22软件进行引物的评价和筛选，设计特异性引物SEQ ID NO:1-12所示，引物由英潍捷基(上海)贸易有限公司合成；

步骤3、引物特异性检测

分别以6种病毒已有毒株DNA/cDNA为模板，扩增相应的目的片段，每个反应体系总体积为50μl，包括单一病毒模板5μl、各自上、下游引物1μl、2×Taqmix酶25μl，水18μl；反应程序为：94℃预变性4min、94℃变性30s、52℃退火45s、72℃延伸1min，进行30个循环，最后72℃延伸10min；反应结束后取5μl产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳分析，产物纯化后送英潍捷基(上海)贸易有限公司测序，验证扩增产物的准确性；同时设无DNA的空白对照组；

以6种病毒已有毒株DNA/cDNA混合物为模板进行PCR扩增，每个反应体系为50μl，包括DNA/cDNA混合物23μl、病毒上、下游引物各1μl、2×Taqmix酶25μl，反应程序、电泳同上；

步骤4、多重PCR体系建立

合6对PCR引物，并以6个毒株病毒DNA/cDNA混合物为模板，50μl反应体系、0.2μM引物设终浓度、52℃退火温度、25个循环，PCR产物用1.5％琼脂糖凝胶电泳分析，并与预期片段大小进行比较；

步骤5、多重PCR特异性检测

根据已建立的多重PCR方法，分别以各病毒株DNA/cDNA为模板进行PCR扩增，每个反应体系为50μl，包括单一病毒模板5μl、6对引物混合物12μl、2×Taqmix酶25μl、去离子水8μl，反应程序为：94℃预变性4min、94℃变性30s、52℃退火45s、72℃延伸1min，进行25个循环，最后72℃延伸7min，PCR产物用1.5％琼脂糖凝胶电泳分析；同时设去离子水为空白对照。