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专利号: 2017102698219
申请人: 山东师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种应用超高效液相色谱-四极杆-轨道阱高分辨质谱技术结合代谢组学方法判别真蜂蜜与糖浆掺假蜂蜜的分析方法,其特征是,包括以下步骤:将真蜂蜜样品和与真蜂蜜蜜源相同的待测糖浆掺假蜂蜜样品分别采用有机溶剂进行样品前处理后,应用超高效液相色谱-四极杆-轨道阱高分辨质谱方法实现对前处理后的样品中的化学成分的分离与测定,然后对得到真蜂蜜样品与待测蜂蜜样品的UHPLC-MS 原始数据进行预处理,最后应用多元统计分析方法主成分分析模型区分真蜂蜜与糖浆掺假蜂蜜;

其中,样品前处理中采用的有机溶剂是含有甲酸的甲醇和水的混合溶剂,甲酸的体积分数为1%,甲醇和水为等体积混合形成混合溶剂;

超高效液相色谱条件为:A 相:乙腈,B 相:醋酸铵水溶液,梯度洗脱流程:0-2 min 1%A, 2-3.25 min 1%-5% A, 3.25-4.25min 5% A, 4.25-7.75 min 5%-55% A, 7.75-9.75 min 55%-90%A, 9.75-11.75 min 90% A, 11.75-12 min 90%-1% A, 12-15 min 1% A;流速:0.2 0.5 mL/min,柱温30 37℃;

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质谱条件为:使用正谱,分辨率,70000;鞘气流速,40 个单位;辅助气流速,10 个单位;

反吹气流速,0 个单位;喷雾电压,3.5 Kv;毛细管温度,320℃;辅助气温度,350℃;扫描范围,m/z:70-1050;扫面模式:全扫描;

将得到的真蜂蜜样品与糖浆掺假蜂蜜样品的UHPLC-MS 原始数据采用Compounds Discoverer 软件进行预处理,该预处理是指对总离子流图原始数据中的色谱峰的提取、峰对齐、去噪音、未知物的检测处理,得到各个峰的保留时间、峰高、峰面积和质荷比数据;然后通过多元统计分析方法PCA 得分图的形式对区分结果进行展示。

2.如权利要求1 所述的分析方法,其特征是:所述糖浆包括大米糖浆、玉米糖浆、甜菜糖浆或复合果葡糖浆。

3.如权利要求1 所述的分析方法,其特征是:样品前处理过程包括:将样品与有机溶剂混合至样品完全溶解,超声,离心,过有机滤膜,得到可上机检测的样品;其中,超声时间为

10 30 min;离心条件:800 1200 rmp离心4 8 min;有机滤膜的孔径为0.20   0.25 μm;样~ ~ ~ ~品与有机溶剂的添加比例为1 g:15 25 mL。

~

4.如权利要求3所述的分析方法,其特征是:样品前处理过程包括:将样品与有机溶剂混合至样品完全溶解,超声,离心,过有机滤膜,得到可上机检测的样品;其中,超声时间为

25 min;离心条件:1000 rmp离心5 min;有机滤膜的孔径为0.22 μm。

5.如权利要求1 所述的分析方法,其特征是:所述醋酸铵水溶液的浓度为10 mM,流速为0.3 mL/min,柱温35℃,进样量3 微升。

6.一种筛选区别于糖浆掺假蜂蜜的真蜂蜜标志性代谢物的方法,其特征是,包括以下步骤:

对真蜂蜜样品与糖浆分别采用有机溶剂进行前处理后,应用权利要求1中所述的超高效液相色谱-四极杆-轨道阱高分辨质谱方法实现对前处理后的样品中的化学成分的分离与测定,然后对得到真蜂蜜样品与糖浆的UHPLC-MS 原始数据进行预处理,最后应用多元统计分析方法主成分分析模型进行差异化合物筛选,确定和鉴定标志性代谢物;

对得到的真蜂蜜样品与糖浆的UHPLC-MS原始数据采用Compounds Discoverer 软件进行预处理,该预处理是指对总离子流图原始数据中的色谱峰的提取、峰对齐、去噪音、未知物的检测处理,得到各个峰的保留时间、峰高、峰面积和质荷比数据,并通过多元统计分析方法主成分分析模型得到PCA得分图和载荷图,筛选出标志性代谢物,进而鉴定标志性代谢物;

在获得载荷图时,通过设定Ratio〉20 或〈0.5,P 值〈0.01,来筛选潜在的标志性代谢物;

对筛选出来的潜在的标志性代谢物首先进行假阳性离子的排除,所述假阳性离子为返回总离子流图中提取不到色谱峰的物质;获得阳离子模式下的标志性代谢物信息,包括分子式,分子离子准确质量数以及保留时间,准确质量数的最大偏差在5 PPM 以内,保留时间偏差在0.2 分钟内;同样的,根据获得的分子式,在阴离子模式下对潜在的标志性代谢物的分子离子进行提取,并根据阴阳离子模式下分子离子峰单位准确质量数对潜在的标志性代谢物进行推测,最终获得区别于糖浆掺假蜂蜜的真蜂蜜标志性代谢物。

7.如权利要求6所述的方法,其特征是:在鉴定标志性代谢物时,通过四极杆-轨道阱高分辨质谱的二级质谱设定高能碰撞诱导裂解技术的高能碰撞池三个能量级来寻找标志性代谢物的碎片离子,从而实现对真蜂蜜样本标志性代谢物的鉴定分析。