1.一种6-苄氨基腺嘌呤人工抗原的合成方法,其特征在于采用由6-氯嘌呤和4-(氨甲基)苯甲酸取代得到的产物作为半抗原,以下简称为6-BA,再用碳二亚胺法将半抗原6-BA与载体蛋白偶联,即得到6-苄氨基腺嘌呤的人工抗原;步骤为:(1)半抗原6-BA的合成:
合成路线如下:
称取化合物1 6-氯嘌呤2.00 g和三乙胺 2.60 g,溶解于20 mL的叔丁醇中,在N2的保护下,向该溶液中加入4-(氨甲基)苯甲酸1.96g,回流72h;冷却至室温,过滤,获得2.10 g 黄色固体,即化合物2;
称取化合物2 1.70 g,加入20 mL甲醇溶解,在0℃条件下,向该溶解液中逐滴加入二氯亚砜0.85 mL,然后加热至室温,搅拌过夜;将反应液减压浓缩,并通过硅胶柱纯化,最终获得白色固体108 mg,即化合物3;
用3mL 6M HCl 溶液溶解300mg化合物3,在80℃条件下搅拌过夜,减压浓缩除去溶剂,获得白色固体140 mg,即半抗原6-BA;
(2)完全抗原6-BA-BSA的制备:采用碳二亚胺法将步骤(1)获得的半抗原6-BA与牛血清白蛋白BSA偶联,得到偶联物完全抗原6-BA-BSA。
2.如权利要求1所述6-苄氨基腺嘌呤人工抗原的合成方法,其特征在于:步骤(2)所述完全抗原6-BA-BSA的制备方法如下:a、称取半抗原6-BA 2.5mg, N-羟基琥珀酰亚胺NHS 3mg,溶解于300 μL N,N-二甲基甲酰胺DMF中,室温搅拌反应10min;再称取1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC
5.5mg,用100 μL DMF充分溶解后,加入到上述6-BA溶液中,室温搅拌反应6~8 h,称为A液;
以6-BA与牛血清白蛋白BSA摩尔比为60︰1计,取10 mg BSA,用pH=8.6、2mL 0.01M硼酸盐缓冲溶液BB溶解,称为B液;再逐滴将A液缓慢加入到B液中,室温反应过夜;即得偶联物6-BA-BSA混合液;
b、透析:取10cm的透析袋,于沸水中煮沸5min,再用60℃的去离子水冲洗3min,保存在4℃去离子水中备用;将偶联物6-BA-BSA混合液放入透析袋,并用pH=7.2、0.01M磷酸盐缓冲溶液PBS透析3天,每天换3次透析液,除去未反应的小分子半抗原,得到完全抗原6-BA-BSA,并通过紫外吸收扫描方法进行鉴定。