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专利号: 2017103394390
申请人: 辽宁大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种测定肝微粒体中芍药苷代谢产物的方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)肝微粒体中芍药苷代谢产物的获得:在培养瓶中,于Tris-HCl缓冲溶液中,加入肝微粒体、NADP、NADH、G-6-P、G-6-P DH和MgCl2,混合均匀,在37℃全温振荡器中温孵5min后,加入芍药苷的Tris-HCl缓冲溶液,得温孵体系;温孵1-3h,温孵过程中,每20min在液面上通O2半分钟,反应后,将培养瓶从振荡器中取出,迅速加入甲醇终止代谢反应,得芍药苷代谢产物;所述的温孵体系中:肝微粒体浓度为2.0mg/mL,NADP浓度为1.0mmol/L,NADH浓度为

0.5mmol/L,G-6-P浓度为10.0mmol/L,G-6-P DH浓度为1.0IU/mL,Mg2+浓度为4.0mmol/L,芍药苷浓度为0.1mg/mL;

2)样品处理:将芍药苷代谢产物涡旋振荡30s,转速5000r/min下离心10min,吸取上清液,旋转蒸干,加入甲醇振荡复溶,再次离心,吸取上清液,在氮气下吹干后,残留物用甲醇复溶,过0.22μm微孔滤膜,进高效液相色谱检测;

3)样品测定:芍药苷代谢产物的检测,具体条件如下:色谱条件:色谱柱:DiamonsilTM ODS C18流速:0.2mL/min

柱温:30℃

进样量:1μL

检测波长:230nm

流动相:A:水+1%的甲酸,B:乙腈+1%的甲酸,采用梯度洗脱,程序如下:质谱条件:

一级质谱:电离模式:电喷雾电离(ESI)扫描模式:负离子扫描

毛细管电压:2.8kV

锥孔电压:3.0V

源温度:110℃

脱溶剂温度:300℃

脱溶剂气体流量:500L/Hr

二级质谱:电离模式:电喷雾电离(ESI)扫描模式:负离子扫描

碰撞气:氮气

毛细管电压:2.8kV

锥孔电压:3.0V

源温度:110℃

脱溶剂温度:300℃

脱溶剂气体流量:500L/Hr

碰撞能量:15-35eV。

2.根据权利要求1所述的一种测定肝微粒体中芍药苷代谢产物的方法,其特征在于:所述肝微粒体为小鼠、大鼠、狗、兔或人的肝微粒体。

3.根据权利要求1所述的一种测定肝微粒体中芍药苷代谢产物的方法,其特征在于:Tris-HCl缓冲溶液的浓度为0.05mol/L,pH 7.4。

4.根据权利要求1所述的一种测定肝微粒体中芍药苷代谢产物的方法,其特征在于:步TM骤3)中,所述的色谱柱,型号为Diamonsil  ODS C18,100mm×2.1mm,1.8μm。