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专利号: 2017103405573
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种植物病原真菌的检测引物组,其特征在于,包括引物对D652f/D1568r和/或引物对A1956f/A2685r;所述引物对D652f/D1568r的上下游引物序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示,所述引物对A1956f/A2685r的上下游引物序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

2.权利要求1所述植物病原真菌的检测引物组在真菌检测中的应用或在制备真菌检测产品中的应用。

3.一种植物病原真菌的分子检测方法,其特征在于,以待测样本总DNA为模板,利用引物对D652f/D1568r进行PCR扩增,反应结束后凝胶电泳检测扩增产物,根据扩增产物是否为

900-1000bp大小的片段来判定待测样本中是否提取到了植物病原真菌或植物的DNA。

4.根据权利要求3所述的分子检测方法,其特征在于,进一步以待测样本总DNA为模板,利用引物对A1956f/A2685r进行PCR扩增,反应结束后凝胶电泳检测扩增产物,根据扩增产物是否为700bp-800bp大小的片段来判定待测样本中是否含有植物病原真菌。

5.根据权利要求3或4所述的分子检测方法,其特征在于,所述待测样本为叶片、枝条、菌丝体或土壤。

6. 根据权利要求3或4所述的分子检测方法,其特征在于,所述PCR反应的反应体系为:

2×反应缓冲液               10μL

10μM上游引物                0.5 μL

10μM下游引物                0.5 μL

模板 DNA                    1 μL

ddH2O                       补至20 μL;

其中,2×反应缓冲液的组分为Taq DNA聚合酶,160 mM Tris-HCl,40 mM(NH4)2SO4,3.0 mM MgCl2,400 μM dNTP。

7. 根据权利要求3所述的分子检测方法,其特征在于,所述PCR反应的程序为:94℃ 5 min;94℃ 30 s,60℃ 30 s,72℃ 1min,32个循环;72℃ 10 min。

8. 根据权利要求4所述的分子检测方法,其特征在于,所述PCR反应的程序为:94℃ 5 min;94℃ 30 s,58℃ 30 s,72℃ 1min,32个循环;72℃ 10 min。

9.一种植物病原真菌的分子检测试剂盒,其特征在于,包括权利要求1所述引物对D652f/D1568r和/或引物对A1956f/A2685r。

10.一种快速扩增真菌ITS区段的试剂盒,其特征在于,包含有引物对A1956f/A2685r。