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专利号: 2017103628552
申请人: 陕西师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于水溶性荧光聚合物快速灵敏检测MicroRNA的方法,该方法不包括疾病的诊断和治疗方法,其特征在于它由下述步骤组成:(1)设计合成探针SH-DNA和探针Acrydite-DNA

根据目标MicroRNA的碱基序列,分别设计合成与目标MicroRNA中8~13个碱基序列互补的探针SH-DNA和探针Acrydite-DNA,其中探针SH-DNA的3’端修饰巯基,探针Acrydite-DNA的5’端修饰丙烯酰胺基,且这两条探针的碱基数目相差0~3个;当探针SH-DNA和探针Acrydite-DNA与目标MicroRNA互补后,探针SH-DNA的5′端和探针Acrydite-DNA的3′端相互毗邻,且这两条探针与目标MicroRNA互补的碱基数目之和与目标MicroRNA的碱基数目相同,同时探针SH-DNA的3’端和探针Acrydite-DNA的5’端分别带有3~5个与目标MicroRNA互补的碱基相毗邻的碱基T;

(2)巯基标记金磁微粒

将探针SH-DNA用磷酸三氯乙酯活化,活化后的SH-DNA与金磁微粒结合,得到巯基标记的金磁微粒;

(3)合成DNA功能化的水溶性荧光聚合物

以过硫酸铵和N,N,N’,N’-四甲基乙二胺的混合物为引发剂,将丙烯酰胺、丙烯酰基荧光素、探针Acrydite-DNA进行无规共聚,得到DNA功能化的水溶性荧光聚合物;

(4)荧光检测目标MicroRNA

将步骤(2)得到的巯基标记的金磁微粒和步骤(3)得到的DNA功能化的水溶性荧光聚合物与不同浓度的目标MicroRNA标准样品进行杂交反应,经磁分离得到杂交产物,对杂交产物经去杂交、磁分离后所得到的上清液进行荧光检测,绘制荧光强度随目标MicroRNA标准样品浓度变化的标准曲线;按照该步骤检测待测MicroRNA样品的荧光强度,结合绘制的标准曲线的线性方程,即可实现对MicroRNA的定性和定量检测。

2.根据权利要求1所述的基于水溶性荧光聚合物快速灵敏检测MicroRNA的方法,其特征在于:在步骤(3)中,所述丙烯酰胺、丙烯酰基荧光素、探针Acrydite-DNA的摩尔比为

10000:1000:1。

3.根据权利要求1所述的基于水溶性荧光聚合物快速灵敏检测MicroRNA的方法,其特征在于:在步骤(4)中,所述杂交反应的温度为30~40 ℃,杂交时间为60~120分钟。

4.根据权利要求1所述的基于水溶性荧光聚合物快速灵敏检测MicroRNA的方法,其特征在于:在步骤(4)中,所述荧光检测的激发波长为494 nm、发射波长为512 nm。