1.一种用于高温发酵生产γ-聚谷氨酸的非谷氨酸依赖型产生菌,其特征在于:所述菌的分类命名为:枯草芽孢杆菌GXG-5 Bacillus subtilis GXG-5,保藏编号为CCTCC NO:M
2017083,保藏日期为2017年3月6日,保藏单位:中国典型培养物保藏中心,保藏地址:中国武汉武汉大学。
2.权利要求1所述非谷氨酸依赖型产生菌高温发酵生产γ-聚谷氨酸的方法,其特征在于:包括如下步骤:(1)菌种活化、保藏:将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GXG-5接于固体斜面培养基上,45 50℃培养12-24h;
~
(2)种子液制备:将步骤(1)所述斜面培养基上1 3cm2的菌苔接入装有30mL液体种子培~养基的250mL三角瓶中,摇床转速160 200rpm,45 50℃培养12 24h至菌株对数生长中期;
~ ~ ~
(3)液体摇瓶发酵:将步骤(2)所得种子液接入灭菌后的液体发酵培养基中,接种量1~
10%(v/v),三角瓶装液量20 80mL/250mL,摇床转速160 250rpm,40 55℃培养48 72h,得到~ ~ ~ ~成熟发酵液;
(4)γ-聚谷氨酸提取纯化:收集步骤(3)所得成熟的发酵液,加入2 5倍体积蒸馏水稀~释,利用孔径为0.45μm微滤膜去除菌体,上清液采用截留分子量为10 50KDa超滤膜浓缩至~原发酵液体积的30 50%,加入2 4倍体积的工业级乙醇进行沉淀,收集沉淀,冷冻干燥得到~ ~γ-聚谷氨酸成品。
3.根据权利要求2所述非谷氨酸依赖型产生菌高温发酵生产γ-聚谷氨酸的方法,其特征在于:步骤(1)所述固体斜面培养基的浓度组成为:葡萄糖10 15g/L,酵母膏2 5g/L,胰蛋~ ~白胨3 6g/L,NaCl 3 6g/L,琼脂15 20g/L,pH值6.5 7.5,蒸馏水配制。
~ ~ ~ ~
4.根据权利要求2所述非谷氨酸依赖型产生菌高温发酵生产γ-聚谷氨酸的方法,其特征在于:步骤(2)所述液体种子培养基浓度组成为:葡萄糖10 20g/L,酵母膏2 5g/L,胰蛋白~ ~胨5 10g/L,NaCl 5 10g/L,pH值6.5 7.5,蒸馏水配制。
~ ~ ~
5.根据权利要求2所述非谷氨酸依赖型产生菌高温发酵生产γ-聚谷氨酸的方法,其特征在于:步骤(3)所述液体发酵培养基浓度组成为:糖质原料10~50g/L,氮源5~30g/L,KNO3 2~10g/L,NaCl 2~10g/L,K2HPO4 0.5~5g/L,pH值6.5~7.5,蒸馏水配制。
6.根据权利要求5所述非谷氨酸依赖型产生菌高温发酵生产γ-聚谷氨酸的方法,其特征在于:所述液体发酵培养基中糖质原料为葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖和糖蜜中的任意一种或几种混合物。
7.根据权利要求5所述非谷氨酸依赖型产生菌高温发酵生产γ-聚谷氨酸的方法,其特征在于:所述液体发酵培养基中氮源为大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酵母膏、NH4Cl、(NH4)2SO4和NH4NO3中的任意一种或几种混合物。