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专利号: 2017104029040
申请人: 江苏师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种高效异源分泌表达米黑根毛霉脂肪酶的基因工程菌,其特征在于所述的基因工程菌通过向含4拷贝数pro-rml基因的能够表达Pro-RML的重组巴斯德毕赤酵母X-33中转化过表达HAC1基因的质粒HAC1-pPIC3.5K得到。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌,其特征在于所述的含4拷贝数的pro-rml基因的重组巴斯德毕赤酵母X-33是通过将含前导肽的脂肪酶基因pro-rml插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPICZαA上构建得到含2拷贝pro-rml基因的表达载体pPICZαA-2prorml;将pPICZαA-2prorml转化到巴斯德毕赤酵母X-33中通过qPCR法筛选获得含4拷贝数pro-rml基因的能够表达Pro-RML的重组巴斯德毕赤酵母X-33;其中,所述的pro-rml基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的基因工程菌,其特征在于所述的过表达质粒HAC1-pPIC3.5K是将HAC1基因插入pPIC3.5K载体BamH I和Not I酶切位点之间所得。

4.权利要求1-3中任一项所述的基因工程菌在异源分泌表达米黑根毛霉脂肪酶中的应用。

5.一种高效异源分泌表达米黑根毛霉脂肪酶的方法,其特征在于通过培养权利要求1-

3中任一项所述的基因工程菌,经诱导表达获得脂肪酶Pro-RML。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于所述培养的条件为28℃,初始pH为7,200rpm培养96小时。

7.根据权利要求5所述的方法,其特征在于所述诱导的条件为每24小时补充一次诱导物甲醇,至甲醇终体积浓度为1.0%(v/v)。