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专利号: 2017104685853
申请人: 商丘师范学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种快速检测真菌细胞内中性油脂含量的方法,其特征在于,包括以下步骤:S1,菌体活化,得到活化的真菌细胞;

S2,液体摇瓶培养,得到真菌细胞培养液;

S3,利用真菌细胞培养液制备菌悬液;

S4,苏丹黑染色

取菌悬液,离心收集菌体;加苏丹黑染液,染色30-60min;离心,弃上清;加无菌水清洗,离心,弃上清;加70%乙醇清洗,离心,弃上清;加无菌水清洗,离心,弃上清,收集固体沉淀;

将固体沉淀转移至载玻片,然后加水悬浮,制成水装片;

S5,中性油脂含量计算

观察水装片上的细胞内黑色油滴,选取着色均匀的视野,测量视野中的单个细胞的体积V,同时测量该细胞内油滴数目i与相应油滴的体积vi,代入公式X%=(∑vi)/V计算中性油脂含量体积百分比,根据M%=d1∑vi/[d1∑vi+d2(V-∑vi)]计算中性油脂占据真菌细胞的重量百分比,其中,i表示油滴数目,vi表示第i个油滴的体积,V代表单个真菌细胞体积,X%表示中性油脂含量体积百分比,M%表示中性油脂占据真菌细胞的重量百分比,d1表示中性油脂的密度,d2表示水的密度。

2.根据权利要求1所述的快速检测真菌细胞内中性油脂含量的方法,其特征在于,所述苏丹黑染色的步骤为:吸取1ml菌悬液,8000r/min离心3min,收集菌体;加苏丹黑染液,染色

30-60min;8000r/min离心3min,弃上清;加无菌水清洗,8000r/min离心3min,弃上清;加

70%乙醇清洗,8000r/min离心3min,弃上清;加无菌水清洗,8000r/min离心3min,弃上清,收集固体沉淀;将固体沉淀转移至载玻片,然后加水悬浮,制成水装片。

3.根据权利要求1所述的快速检测真菌细胞内中性油脂含量的方法,其特征在于,对于丝状的真菌细胞,V=(3/4)πr2h,其中,π为圆周率,r为真菌细胞半径,h是菌体细胞长度。

4.根据权利要求1所述的快速检测真菌细胞内中性油脂含量的方法,其特征在于,对于球形的真菌细胞,V=(4/3)πr3,其中,π为圆周率,r为真菌细胞半径。

5.根据权利要求1所述的快速检测真菌细胞内中性油脂含量的方法,其特征在于,对于椭球型的真菌细胞,V=(3/4)πabc,其中,π为圆周率,a为真菌细胞沿x轴的赤道半径,b为真菌细胞沿y轴的赤道半径,c为真菌细胞沿z轴的极半径。