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专利号: 2017105398767
申请人: 广西大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种鸡传染性喉气管炎活疫苗中A、B、J亚群禽白血病病毒的检测方法,其特征在于:采用DMEM对商品化鸡传染性喉气管炎活疫苗进行稀释,然后接种DF-1细胞,37℃作用1h后换成含1%FBS的DMEM进行培养7天;收集细胞培养上清进行禽白血病病毒p27群特异性抗原ALV-p27检测;对ALV-p27阳性样品收集细胞培养物并抽取cDNA,用亚群特异性引物进行A、B、J亚群禽白血病病毒的鉴定,其对应阳性孔细胞,用亚群特异性单抗进行IFA检测。

2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于按以下步骤操作进行:

(1)无菌条件下将2mL DMEM加入商品化鸡传染性喉气管炎活疫苗中,使其溶解;

(2)将溶解的疫苗使用DMEM进行倍比稀释,稀释比例分别为1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64,采用各稀释比例的疫苗稀释液作用于单层DF-1细胞1h,随后换成含1%FBS的DMEM维持培养至7天后,通过观察细胞生长状况,筛选出疫苗的最优稀释比例为1∶16,然后进行A、B、J亚群禽白血病病毒检测;

(3)按1∶16稀释疫苗,疫苗稀释液以24孔板复孔作用于单层DF-1细胞1h,随后换成含

1%FBS的DMEM维持培养至7天;

(4)收集细胞培养物上清,进行ALV-p27抗原检测;ALV-p27阳性样品收集细胞培养物抽取cDNA,用亚群特异性引物进行A、B、J亚群禽白血病病毒的鉴定,其对应阳性孔细胞,用亚群特异性单抗进行IFA检测;

(5)鉴定为阳性者则取同一批号另一瓶疫苗按照上述步骤进行复检,以排除操作污染的可能性。

3.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:所述ALV-p27抗原检测所用试剂盒为IDEXX ALV-p27试剂盒。

4.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:所述稀释液为Gibco生产的DMEM。

5.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:所述维持培养液为含1%FBS的DMEM。