1.测定肠内菌中芍药苷代谢物的液质联用方法,其特征在于包括如下步骤:
1)肠内菌的制备:取粪便,在无菌无氧操作条件下,将粪便放入到一个充满氮气的自封袋中,使粪便均质化,然后放入到灭菌完毕的GAM培养基中,轻轻振摇,置无菌厌氧恒温培养箱中,在37℃下培养24h;
2)芍药苷的肠内菌转化:在无菌厌氧培养箱中,向培养的肠内菌中加入芍药苷,然后放置在37℃恒温摇床上振摇,速度为100r/min,培养2-24h,取出,加入乙酸乙酯终止反应,得芍药苷的肠内菌代谢产物;
3)样品处理:采用萃取液萃取芍药苷的肠内菌代谢产物三次,合并有机相,旋转蒸干,再用甲醇转移至EP管中,过0.22μm微孔滤膜,获得代谢产物样品;
4)样品测定:具体条件如下:色谱条件:色谱柱:Dikma DiamonsilTM ODS C18色谱柱;
洗脱时间:t=50min;
进样量:10μL;
检测波长:λ=230nm;
柱温:30℃;
流速:0.5mL/min;
流动相:水(A)+甲醇(B),采用梯度洗脱,程序如表1所示;
表1
时间(min) 流速(mL/min) A(%) B(%)
0 0.5 85 15
10 0.5 70 30
20 0.5 60 40
35 0.5 0 100
50 0.5 0 100
质谱条件:一级质谱:电离模式:电喷雾电离(ESI);
扫描模式:正离子扫描;
电喷雾电压:4.0bar;
干燥气流速:10L/min;
干燥气温度:200℃;
二级质谱:电离模式:电喷雾电离(ESI);
扫描模式:正离子扫描;
碰撞气:氮气;
毛细管电压:2.8kV;
锥孔电压:3.0V;
源温度:110℃;
脱溶剂温度:350℃;
脱溶剂气体流量:50L/Hr;
碰撞能量:15-35eV。
2.根据权利要求1所述的测定肠内菌中芍药苷代谢物的液质联用方法,其特征在于,所述的粪便来源于人体或动物体。
3.根据权利要求1所述的测定肠内菌中芍药苷代谢物的液质联用方法,其特征在于,步骤3)中,所述的萃取液为水饱和的乙酸乙酯溶液。
4.根据权利要求1所述的测定肠内菌中芍药苷代谢物的液质联用方法,其特征在于,步骤3)中,所述的萃取液为水饱和的甲基叔丁基醚溶液。
5.根据权利要求1所述的测定肠内菌中芍药苷代谢物的液质联用方法,其特征在于,所述的色谱柱,型号为DiamonsilTM ODS C18色谱250mm×4.6mm,5μm。