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专利号: 2017105464307
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种批量化对酒类样品中氨基甲酸乙酯快速测定的方法,其特征是步骤如下:首先利用EC专用固相柱对酒类样品进行前处理萃取出其中的EC;然后在萃取所得溶液体系中加入EC降解酶将EC降解为乙醇、CO2和NH4+;最后往检测体系中加入底物丙酮酸钠和还原性辅酶I NADH并用缓冲液调节pH,利用丙氨酸脱氢酶AlaDH修饰的丝网印刷电极SPE进行电化学检测,在丙氨酸脱氢酶AlaDH催化下,上步反应生成的NH4+和加入的丙酮酸钠、还原态的NADH反应生成丙氨酸钠和氧化态的NAD+,利用电流-时间法测定NADH消耗造成的电流响应值下降与EC浓度的线性关系来测算出酒类样品中EC含量。

2.根据权利要求1所述批量化对酒类样品中氨基甲酸乙酯快速测定的方法,其特征是具体步骤如下:(1)制备丙氨酸脱氢酶修饰的丝网印刷电极:将0.1% 0.5%的壳聚糖CS和0.4% 0.7%还~ ~原氧化石墨烯RGO加入到100mL 质量浓度为1%的醋酸溶液中得到CS/RGO混合液体系,然后将15 25U/mL丙氨酸脱氢酶加入到该混合体系中,得到CS/RGO/AlaDH生物复合材料;将20~ ~

30μL的CS/RGO/AlaDH均匀覆盖于丝网印刷电极表面,4℃冰箱储存48h,干燥成膜,制备得到CS/RGO/AlaDH/SPE;

(2)EC标准样品的检测和标准曲线的绘制:使用pH 4.5的柠檬酸缓冲液配制不同浓度的标准EC溶液,向其中加入10 16U/mL 的EC降解酶,常温下反应1h;加入pH10的碳酸钠缓冲~液,将反应体系pH调到10,然后加入30 50mmol/L的丙酮酸钠和0.4 0.6mmol/L的NADH,随后~ ~将上述修饰好的CS/ RGO/AlaDH/SPE电极插入溶液中,在0.5 0.6V电压下,利用电流-时间~法i-t扫描5min,记录NADH在反应前后的电流响应变化值;根据电流响应变化值与EC浓度之间的关系,绘制出相应的线性关系标准曲线;

(3)萃取:利用EC专用固相柱对酒类样品进行前处理,萃取出其中的EC至待检溶液体系,具体步骤为:准确量取2mL酒类样品,加入100μL 2.0~3.0μg/mL的D5-氨基甲酸乙酯内标使用液、氯化钠0.3 0.4g,40kHz超声波处理10 20min,混合液加到萃取柱上,抽成0.1MPa真~ ~空,静置10min,先用10 15mL正己烷淋洗除杂,接着用乙酸乙酯:乙醚按照体积比1:1配置成~洗脱液进行洗脱,洗脱液收集于具塞刻度试管中,用N2吹至洗脱液剩余0.4~0.5mL,用pH 

4.5的柠檬酸缓冲液定容至1.0mL;

(4)计算:取步骤(3)定容后的溶液按步骤(2)操作,测定相应的电流响应变化值,根据上述标准曲线求得EC浓度,并进一步计算出酒样中的EC含量。

3.根据权利要求2所述批量化对酒类样品中氨基甲酸乙酯快速测定的方法,其特征是:步骤(3)所述EC专用固相柱为商品化Cleanert EC专用固相柱,碱性硅藻土。

4.根据权利要求2所述批量化对酒类样品中氨基甲酸乙酯快速测定的方法,其特征是:步骤(3)所述酒类样品为黄酒。

5.根据权利要求2所述批量化对酒类样品中氨基甲酸乙酯快速测定的方法,其特征是:步骤(1)所用丝网印刷电极的工作电极直径为4mm,材料为碳。

6.根据权利要求2所述批量化对酒类样品中氨基甲酸乙酯快速测定的方法,其特征是:步骤(2)所述不同浓度的标准EC溶液具体为0~1000μM。