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专利号: 2017105620432
申请人: 广西中医药大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种从杨桃根中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)采收杨桃根,晾干后粉碎为粗粉;

2)取杨桃根粗粉投入水中浸泡,加热至沸腾后,煎煮0.8-1.2 小时,过滤,重复以上步骤3次,得到水提取液;浓缩;再向其中加入乙醇,沉淀过夜,抽滤,取上清液,浓缩,得浓缩上清液;

3)对步骤2)得到的浓缩上清液应用色谱柱进行洗脱粗分,洗脱梯度为:水 → 第一乙醇溶液 → 第二乙醇溶液 → 第三乙醇溶液 → 第四乙醇溶液,其中乙醇浓度依次增高;

然后分别浓缩,依次得到水洗脱部位浸膏1、第一乙醇洗脱部位浸膏2、第二乙醇洗脱部位浸膏3、第三乙醇洗脱部位浸膏4和第四乙醇洗脱部位浸膏5;

4)取步骤3)得到的第二乙醇洗脱部位浸膏3,应用色谱柱以氯仿-甲醇系统分7个梯度洗脱,其中,氯仿的体积分数由高至低,每个梯度洗脱三个柱体积,依次得到流份6-12;

5)对步骤4)得到的流份10进行色谱柱分离,以甲醇-水系统分9个梯度洗脱,其中,甲醇的体积分数由低至高,每个梯度洗脱三个柱体积,依次得到流份13-21;

6)对步骤5)得到的洗脱流份14进行色谱柱分离,以甲醇-水系统分7个梯度洗脱,其中,甲醇的体积分数由低至高,每个梯度洗脱三个柱体积,依次得到流份22-28;

7)对步骤6)得到的洗脱流份23进行色谱柱分离,应用色谱柱以氯仿-甲醇系统分3个梯度洗脱,其中,氯仿的体积分数由高至低,每个梯度洗脱三个柱体积,依次得到流份29-31,

31号流份浓缩后干燥,即得目标产物α-葡萄糖苷酶抑制剂;

所述步骤3)中,采用以DIANION HP20树脂为填料的色谱柱对步骤2)得到的上清液进行洗脱粗分,所述第一乙醇溶液的体积分数为20%,第二乙醇溶液的体积分数为40%,第三乙醇溶液的体积分数为70%,第四乙醇溶液的体积分数为95%;

所述步骤4)中,取步骤3)得到的第二乙醇洗脱部位浸膏3,应用色谱柱以氯仿-甲醇系统梯度洗脱,具体为:取15g步骤3)得到的乙醇洗脱部位浸膏3,加少量95%乙醇溶解,用硅胶

15 g拌样,干燥至恒重,用氯仿浸泡过24小时的硅胶340 g装柱,上样,然后用氯仿-甲醇系统进行梯度洗脱,共设7个梯度,即氯仿和甲醇的体积比依次为15 : 1 → 10 : 1 → 8 : 

1 → 6 : 1 → 4 : 1 → 2 : 1 → 1 : 1,每个梯度洗脱三个柱体积;

所述步骤5)中,对步骤4)得到的流份10进行色谱柱分离,以甲醇-水系统梯度洗脱,具体为:将步骤4)得到的流份10溶于少量50%甲醇中,用MCI Gel为填料进行装柱,上样,然后以甲醇-水系统进行梯度洗脱,共设9个梯度,即甲醇和水的体积比依次为10 : 90 → 20 : 

80 → 30 : 70 → 40 : 60 → 50 : 50 → 60 : 40 → 70 : 30 → 80 : 20 → 100 : 

0,每个梯度洗脱三个柱体积;

所述步骤6)中,对步骤5)得到的流份14进行色谱柱分离,以甲醇-水系统梯度洗脱,具体为:将步骤5)得到的流份14溶于少量50%甲醇中,用RP-18为填料进行装柱,上样,然后以甲醇-水系统进行梯度洗脱,共设7个梯度,即甲醇和水的体积比依次为10 : 90 → 20 : 

80 → 30 : 70 → 40 : 60 → 50 : 50 → 60 : 40 → 70 : 30,每个梯度洗脱三个柱体积;

所述步骤7)中,对步骤6)得到的流份23进行色谱柱分离,以氯仿-甲醇系统梯度洗脱,具体为:将步骤6)得到的流份23溶于甲醇中,用1 g硅胶进行拌样,干燥至恒重,用氯仿浸泡过24小时的硅胶20 g装柱,上样,然后用氯仿-甲醇系统进行梯度洗脱,共设3个梯度,即氯仿和甲醇的体积比依次为15 : 1 → 10 : 1 → 5 : 1,每个梯度洗脱三个柱体积,依次得到流份29-31,将31号流份浓缩后干燥,即得目标产物α-葡萄糖苷酶抑制剂;

所述目标产物为3,4,5-三甲氧基苯酚1-O-β-D-葡萄糖基-(1→6)-β-D-葡萄糖苷;结构式如下:。

2.如权利要求1所述的从杨桃根中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法,其特征在于,采收杨桃根,晾干后粉碎为粗粉,粗粉的粒径为10-20目。

3.如权利要求1所述的从杨桃根中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法,其特征在于,所述步骤2)中,水的重量为投入其中的杨桃根粗粉重量的18-22倍;乙醇的体积为水提取液体积的3倍。

4.如权利要求1所述的从杨桃根中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法,其特征在于,所述步骤2)中,每2Kg杨桃根粗粉经浸泡、煮沸、过滤后得到的水提取液,对应浓缩至1.5L。