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专利号: 2017105854844
申请人: 江汉大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种循环肿瘤DNA检测探针,其特征在于,包括:金纳米粒子-适配体复合物及包裹了磷酸铅的去铁铁蛋白-抗体复合物。

2.一种循环肿瘤DNA检测传感器,其特征在于,包括:丝网印刷电极以及设置在其上的金纳米粒子-适配体复合物与包裹了磷酸铅的去铁铁蛋白-抗体复合物。

3.如权利要求2所述的循环肿瘤DNA检测传感器,其特征在于,所述金纳米粒子-适配体复合物的制备方法包括:按照2∶1的体积比,依次将金纳米粒子AuNPs和适配体Aptamer混合均匀,室温避光静置;

加入等量的磷酸缓冲盐溶液PBS,室温避光静置;

加入氯化钠NaCl溶液,使溶液中NaCl的浓度调节至0.05M,随后室温静中将NaCl的浓度调节至0.1M;

在12,000rpm条件下离心30min,弃去上层清液,用0.1M的NaCl和PBS缓冲液润洗下层固体,储存在0.02%(v/v)吐温20(Tween 20)水溶液中。

4.如权利要求2所述的循环肿瘤DNA检测传感器,其特征在于,包裹了磷酸铅的去铁铁蛋白-抗体复合物的制备方法包括:将包裹了磷酸铅的去铁铁蛋白加入至含有可溶于水的碳二亚胺EDC和N-羟基琥珀酰亚胺NHS的2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)缓冲溶液中并超声30分钟;

所得混合溶液以不低于10000rpm离心5分钟,弃去上层清液;

向离心后得到的沉淀中加入5-甲基胞嘧啶单克隆抗体(1mg/mL),室温下孵化3小时;

混合液在10,000rpm条件下离心10min,弃去上层清液,用PBS润洗下层固体,用PBS缓冲溶液储存4℃冰箱中备用。

5.一种循环肿瘤DNA检测方法,其特征在于,包括:

将待检样本与金纳米粒子-适配体复合物Aptamer-AuNPs混合;

再将包裹了磷酸铅的去铁铁蛋白-抗体复合物mAb-LPA加入到上述混合物中;

用微分脉冲伏安法进行电化学检测,在扫速为50mV/s,电位扫描范围-0.9~-0.3V条件下检测包裹了磷酸铅的去铁铁蛋白LPA的信号,测定样品中ctDNA(PIK3CA E542K)的含量。