1.一种分析桑蚕丝丝素蛋白中氨基酸径向分布的方法,其特征在于包括以下步骤:
1)称取桑蚕丝作为样品,用去离子水清洗,去除表面污染物,烘干;
2)将烘干的样品以1∶95-105的浴比在含有0.4-0.6wt%Na2HPO4和0.8-1.2wt%C17H35COONa的混合溶液中煮沸25-35min,进行脱胶处理,共脱胶两次;
3)脱胶之后,将样品用去离子水冲洗干净,放入55-65℃烘箱,得到干燥的丝素纤维;
4)取直径相近的丝素纤维,等质量分为A、B、C、D、E五组,其中A组作为对照组,不做任何处理;
5)将B、C、D、E组浸入到胰蛋白酶溶液中进行酶解,反应完成后,对酶进行灭活处理,保留B组残余丝素;
6)将步骤5)酶解过的C、D、E组浸入到碱性蛋白酶溶液中进行酶解,反应完成后,对酶进行灭活处理,保留C组残余丝素;
7)将步骤6)酶解过的D、E组浸入到木瓜蛋白酶溶液中进行酶解,反应完成后,对酶进行灭活处理,保留D组残余丝素;
8)将步骤7)酶解过的E组浸入到胰弹性蛋白酶溶液中进行酶解,反应完成后,对酶进行灭活处理;
9)对B、C、D、E组残余丝素进行过滤和洗涤处理,得到在径向上具有不同程度溶蚀的残余丝素;
10)利用氨基酸自动分析仪对A和B、C、D、E组残余丝素进行氨基酸分析,可得到各组中氨基酸的种类和含量。
2.如权利要求1所述的一种分析桑蚕丝丝素蛋白中氨基酸径向分布的方法,其特征在于,步骤5)中酶解反应具体为:将B、C、D、E组以1∶40的浴比放入预先配制好的1.5g/L的胰蛋白酶溶液中,控制反应温度45-50℃,溶液pH 7~9,反应时间为6h;反应完成后,对酶进行灭活处理,保留B组残余丝素。
3.如权利要求1所述的一种分析桑蚕丝丝素蛋白中氨基酸径向分布的方法,其特征在于,步骤6)中酶解反应具体为:将步骤5)酶解过的C、D、E组以1∶40的浴比放入预先配制好的
1.5g/L的碱性蛋白酶溶液中,控制反应温度40~55℃,溶液pH 9~10,继续反应6h;反应完成后,对酶进行灭活处理,保留C组残余丝素。
4.如权利要求1所述的一种分析桑蚕丝丝素蛋白中氨基酸径向分布的方法,其特征在于,步骤7)中酶解反应具体为:将步骤6)酶解过的D、E组以1∶40的浴比放入预先配制好的
1.5g/L的木瓜蛋白酶溶液中,控制反应温度50~60℃,溶液pH 6~7,继续反应6h;反应完成后,对酶进行灭活处理,保留D组残余丝素。
5.如权利要求1所述的一种分析桑蚕丝丝素蛋白中氨基酸径向分布的方法,其特征在于,步骤8)中酶解反应具体为:将步骤7)酶解过的E组以1∶40的浴比放入预先配制好的
1.0g/L的胰弹性蛋白酶溶液中,控制反应温度35~39℃,溶液pH8.5~9.2,继续反应6h;反应完成后,对酶进行灭活处理。
6.如权利要求1-5之一所述的一种分析桑蚕丝丝素蛋白中氨基酸径向分布的方法,其特征在于,步骤5)至步骤8)中的酶溶液需要现配现用;同时需要用0.1%Na2CO3溶液调节溶液pH。
7.如权利要求1-5之一所述的一种分析桑蚕丝丝素蛋白中氨基酸径向分布的方法,其特征在于,步骤5)至步骤8)中灭酶处理为:在90℃的烘箱中保温1h或改变溶液的pH使溶液呈现过酸或过碱,使酶失活。