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专利号: 2017106232612
申请人: 燕山大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一株可耐受高浓度谷氨酸钠和葡萄糖产γ-聚谷氨酸的贝莱斯芽孢杆菌,其特征在于:该菌株命名为Bacillus velezensis Z3,该菌株于2017年5月22日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏管理中心,保藏号为CGMCC14180。

2.权利要求1的可耐受高浓度谷氨酸钠和葡萄糖产γ-聚谷氨酸的贝莱斯芽孢杆菌在高浓度底物浓度下产γ-PGA的方法,其特征在于:

1)接种:将B.velezensis Z3接种在LB固体培养基上,32-37℃培养24-30h;

2)种子培养:挑取单菌落接种到100ml SGG液体培养基中,SGG液体培养基配方为:葡萄糖20g/L,谷氨酸钠20g/L,酵母浸膏粉1g/L,磷酸氢二钠1g/L,磷酸二氢钠6g/L,硫酸镁

0.5g/L,硫酸锰0.01g/L,pH为6.8;接种后32℃180rpm培养20-24h至对数生长期;按照2%接种量将上述对数期培养物转接至100ml SGG液体培养基中,32℃180rpm振荡培养16-20h进行种子的二次活化,得到γ-PGA发酵培养的种子;

3)发酵培养:按照1-3%接种量将二次活化的B.velezensis Z3种子接种到γ-PGA发酵培养基FGG中,FGG发酵培养基为:葡萄糖40-120g/L,谷氨酸钠100-250g/L,酵母浸膏粉1g/L,磷酸氢二钠1g/L,磷酸二氢钠6g/L,硫酸镁0.5g/L,硫酸锰0.01g/L,pH6.8-7.5,接种后

32-37℃180rpm发酵培养60-65h,得到含有γ-PGA的发酵液。

3.根据权利要求1所述的可耐受高浓度谷氨酸钠和葡萄糖产γ-聚谷氨酸的贝莱斯芽孢杆菌在高浓度底物浓度下测定γ-PGA的方法,其特征在于:CTAB法测定γ-PGA的产量:准确取2mlγ-PGA标准液于试管中,γ-PGA标准液的浓度分别为0mg/L,12mg/L,18mg/L,24mg/L,30mg/L,36mg/L,准确加入2ml 10%的溴化十六烷三甲基铵试液,溴化十六烷三甲基铵简称为CTAB,充分振荡后静置3min,然后将反应液倒入石英比色杯中,3min时测定波长在

250nm下的吸光度;CTAB法测定γ-PGA的标准曲线的回归方程为:Y=44.813x+0.8982,式中Y表示γ-PGA含量,单位是mg/L,公式中x为γ-PGA标准曲线制作溶液在250nm测定的吸光值,该回归方程的R2为0.9971;将含有γ-PGA的发酵液稀释200倍后,按照上述过程测定稀释后样品的OD250值,将测定得到的OD250吸光值带入到上述γ-PGA标准曲线计算得到稀释样品中γ-PGA含量,再乘以样品的稀释倍数即为γ-PGA的产量,产量单位按g/L计。